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标题:【分享帖】Transwell侵袭实验总结

66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-12-26 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
自制小室的心得：小室是重复利用的，膜是自己买的（whatman?)一百张580元，每张可以剪出4个24孔板用的膜，也就是说一块板要6张，可以做16次，先用将小室的圆大小绕小室画在纸上，剪一个膜板出来，然后再用模版剪就可以避免浪费了，以前师兄都只能剪3个，改进后就成4个了，可以省4次。然后就是把膜贴在小室上，个人建议用乙醇清洗小室，不用水，干得快。用指甲油贴上膜就好了（涂在小室口径上，不要太多，够封好就行，太多会流到膜上影响细胞闯过）。最后紫外过夜就行了。
个人觉得做小室还是挺有意思的，也有艺术感和成就感产生，是实验中休息放松的好方式。
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发表于 2012-12-26 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你好~~
我打算做趋化实验~有问题想请教一下~

我想观察某药对细胞干预12小时后 细胞趋化能力的变化~

那么，我是应该先对上室细胞干预12小时以后 ，再往下室加趋化因子呢？还是应该在上室加干预的同时往下室加趋化因子呢？如果是后者的话那上层的药物会不会扩散到下室去呢？

先谢谢战友啦~~
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发表于 2012-12-26 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
相关疾病：
肿瘤

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有关细胞技术的热门话题——Transwell侵袭实验


应版主 飘泊 之邀整理此帖，在整理的过程中也学到很多知识，在此与大家分享。

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Transwell在肿瘤细胞的研究方面非常有用,但是应当注意尽量将实验做到动物,因为仅仅体外结果意义有限.
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hold住[使用道具]
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发表于 2012-12-26 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
辛苦了 很受用 这个应用于细胞共培养也不错哦
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发表于 2012-12-26 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有没有比较客观的计算Transwell结果的好方法？结晶紫染色计数，总觉得不是很客观，人为因素太大
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发表于 2012-12-26 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问
水化基底膜的时候，要加BSA的无血清培养液，是加到上室里吗？
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2012-12-26 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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我准备买corning公司的6.5mm，0.8um的Transwell，这里代理公司说要三个月，大家有没有快一点的代理公司，能告诉一下吗？我杭州的，其他地方的代理公司也可以的，谢谢大家了！
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发表于 2012-12-26 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
为什么小室内一定要铺matrigel啊，不铺影响大吗
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发表于 2012-12-26 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有没有比较客观的计算Transwell结果的好方法？结晶紫染色计数，总觉得不是很客观，人为因素太大

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用结晶紫染色计数后再加用醋酸溶液洗脱后于570nm测O.D值。我目前这么做的，感觉还不错
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tuuu2[使用道具]
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发表于 2012-12-27 11:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好~~
我打算做趋化实验~有问题想请教一下~

我想观察某药对细胞干预12小时后 细胞趋化能力的变化~

那么，我是应该先对上室细胞干预12小时以后 ，再往下室加趋化因子呢？还是应该在上室加干预的同时往下室加趋化因子呢？如果是后者的话那上层的药物会不会扩散到下室去呢？

先谢谢战友啦~~

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接这位战友的发言同问，既然上室那层膜允许细胞穿过到下室，那趋化因子加到上室或下室都没有什么关系了，反正溶液中的因子都可以自由穿过这层膜，同样，所谓的上室培养基和下室培养基似乎也没有区别了，因为它们因为膜的通透性而可以自由流动，那这个上、下室加趋化因子和不同培养基还有意义吗？

还有，膜的孔径如何精确选择，细胞生长在膜上，没有受趋化因子作用时不应该穿透膜而到下室，受到刺激时才变形而穿透膜到下室，那膜的孔径是否对细胞迁徙有影响，又如何界定？
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