小中大另外，用酒精灯烧瓶口起不了什么作用。那点瞬时温度，我觉得不足以烧死细菌。很多瓶口甚至还有残留水珠，那点温度都不至于让水沸腾，如果水里有细菌，能烧死么？养细菌的标准操作，比如接种环，是要烧到变红，而推平板的玻璃三角棒，是要蘸了酒精以后，直接点燃。所以关于酒精灯在养哺乳动物细胞方面的使用，我觉得不是那么重要。
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经常在火焰上过一下，是有用的。不知道大家是不是有这样的经验，有时手背靠火还有点距离，但能闻到烧焦的味道，那是汗毛被烧了；如果再近点，可能就手背就有瞬时灼烧的痛感了，那是烧到皮了（手上酒精干的时候也会发生，当然如果刚擦的酒精就更容易发生了）。这说明即使在火边晃晃，蛋白也能被烧变性。细菌数量如果屈指可数，就很容易被烧死了。当然瓶口如果有液体，效果就大打折扣了。所以操作的一个细节就是如果采取倒的方式换液，一定不能让水珠挂在瓶口外（如果是培养液细菌很容易在瓶口滋生）。这里也有个诀窍（对新手而言），那就是倒液时快速翻转瓶口使向下，余液会在瓶口一滴一滴往下滴，在最后一滴下滴离开瓶口的瞬间翻转瓶口使向上，液滴就不会留在瓶口外了。万一瓶口外有液滴，用酒精棉（拧干酒精）擦干瓶口外的液滴（记住酒精棉千万不能伸入到瓶口内），并在火上灼烧（塑料瓶的话晃、转着烧，以免烧化）。
细胞培养，细节很重要。没污染不代表操作就一定正确。
污染也是有几率的，严格要求比如几率是千万分之一，不严格点比如是百万分之一，可能也很少污染，但是污染的几率增高了。
