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标题:【分享帖】细胞培养减少污染的小细节

greenbee[使用道具]
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写的很好

酒精喷手很要命啊 养细胞半年了 手被直接喷粗糙了
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8princess8[使用道具]
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多谢细心的楼主啊……
其实本人也养细胞一年多了,一开始也经常污染,有时候一两个月也没事。
细节决定是否失败,可以改掉好多自己不好的习惯。
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wu11998866[使用道具]
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进细胞室不带手套、脚套的吗?我想问楼主,有没有那种白大褂,就是袖子很长,可以在超净台操作的时候,让手套能套住扎紧袖口,操作的时候又不会因为袖子被扎住了而影响活动。因为我觉得扎住袖口后胳膊的活动很受限制。还有,请问楼主有没有细胞被不同情况污染了后,具体的变化图片。谢谢楼主。这篇文章很不错。其实这些具体的实验室操作细节,才是所有从事这个的人员最珍惜的。小小的失误会浪费太多的人力物力和财力了。真心感谢。
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JK.jon[使用道具]
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感觉这些细节都注意到了,第一次做的原代培养还是出现了霉菌的污染,不知道是什么原因,培养基验菌没有啥问题啊!
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831226[使用道具]
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养细胞有几年经验了,现在负责我们医院的细胞室,斗胆评论几句:
关于是否带手套的问题:这不是关键,看个人的习惯。有的同志是外科的研究生,有戴手套操作的习惯,好的,那就戴;有的学生,包括本人,不习惯带手套,那就肥皂洗手,酒精喷手;无论是否戴手套,手从超净台拿出,触碰了可能有污染的物品,就要再次酒精喷手。我的手在冬天的时候经常裂小口子,习惯了,这是咱们工作的象征,可以给领导看看。
穿白大衣?我们实验室有的学生即养动物又做细胞,他的白大衣绝对不可以穿进去,有的研究生不养动物,但是白大衣很脏,所以我在细胞室准备了一套白大衣,要求大家在从培养箱取细胞或者操作的时候一定换上。换一件干净的,不讨论是否这个步骤是否必要,但是这样做绝对有减少污染的可能。
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831226[使用道具]
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再补充点:

外国人用不用酒精灯的问题:外国我还没有去过,但是我知道国内的细胞室有的是超净台,有的是生物安全柜,这俩东西有区别的,大家可以搜搜既知道。我们细胞室这两样都有,其中的一个差别就是生物安全柜内禁用明火,据说明书解释是因为会影响到净化的气流,一开始我们刚买了生物安全柜的时候挺高兴,发现这个差别后,着实难受了一阵子,因为习惯了酒精灯,后来学生们还是把酒精灯放进去了,我也默许了,因为我自己也别扭。外国人不用酒精灯因为人家用的是生物安全柜,没有必要,而且空气干净,而且没有酒精灯情结。
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相关疾病:
支原体感染
细胞就生长缓慢就是支原体感染吗'怎么知道是不是支原体感染啊''
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fox_79[使用道具]
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很多实验者都不bother自己洗手,酒精一喷就去实验了。我告诉大家,这极端错误
个人经验是,你仔细洗手比喷酒精效果还好。最好的是肥皂/香皂仔仔细细的洗手,一直到手腕,指甲缝都要洗。洗两遍是一个不错的选择。然后手上喷酒精,
有人穿半截袖的白大褂去做实验,每次我看到都想骂。白大褂袖口要长,最好是袖口扎紧的那种,如果不能的话,把袖口窝向手臂。裸露的手腕部分一定也要喷酒精。戴上手套后手请避免接触工作台外面,如果不得已接触,那再喷酒精。宁可手套酒精味多一些。
拿培养瓶和培养液时候请托下面拿,切忌不要拿瓶颈部位。
每天实验开始时候,超净台/实验间 照20分钟紫外是不错的选择
有一点要注意的是,超净台里面的东西一定要尽量少放。放的越多越容易污染
尽量避免操作时候说话,尤其是严禁细胞房打闹说笑。
每天观察细胞状态,不要总想着save,而是发现细胞不对劲(比如生长缓慢)就立即扔掉。有些(比如支原体)污染,镜检是看不到的,但是细胞的生长异常。所以如果细胞生长异常,那么请扔掉,同时由于支原体空气传播,请检查自己的培养液和培养箱是不是污染。----------------------------------------------------------------------------------------------------分隔福----------------------------------------------------------------
以上都有注意到,但是最近到了一批原代细胞,很珍贵,换液几次,已经看到2次疑似真菌的小点(直径略小于中华铅笔芯),细胞长势还是很好,该怎么处理呢?扔掉实在太可惜了!还没有传代呢,一次都没有,愁煞人!!!请教大家,有木有除了弃掉之外的好建议?现在每天都生活在恐惧和担心中,不知明天一早醒来,进去一看,是不是会看到最不愿看到的噩梦----污染!

每天的常规:

超净台,细胞室,缓冲间同步紫外40mins,换气15mins,洗手换手术服及拖鞋,戴帽子口罩手套,酒精喷手,酒精灯过火,完毕超净台,倒置显微镜台,桌面,地面分别酒精擦擦拭过。器具试管泡酸,三道流水线(流水冲洗12遍以上,蒸馏水,离子水各3遍)高压蒸过,每天在实验室来的最早(大多数,除了偶尔几次),走的最晚,这已经成为常规。可这次为迎接新的人源细胞,已经反复将细胞室内外擦拭清除了不下五次,唯独没有进行乳酸或甲醛熏蒸!!!
现在不知该怎么办了,纠结中,奢望能在绝望中听到些诸位前辈和大虾们的希望的声音... ...
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