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标题:【求助】请高手帮忙看看细胞是不是支原体污染？

北风那个吹[使用道具]
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发表于 2013-1-4 12:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再传一张照片供大家看看，帮忙顶顶！


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北风那个吹[使用道具]
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发表于 2013-1-4 12:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得这张很典型，大虾帮忙分析一下


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dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2013-1-4 12:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

支原体的问题是比较复杂，通常没有经验的人很难判断。
我建议你看看我上面给的链接以及那个网页内部的链接，那里面有不少有用的知识可供大家一起研究，学习和探讨。至于确定支原体污染，我觉得PCR的方法还是比较可信的，你要不放心，可以再做几次，同时一定做好正、负对照。
感觉你的DAPI染色的细胞还是蛮像是支原体污染。“若有支原体污染，在Vero细胞核外与细胞表面会出现蓝色萤光小点或是丝状点。其形状一致，与细胞残片染成之不规则点状物不同。”这个是那个网站上的原话。
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发表于 2013-1-4 12:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用过Plasmocin 来杀支原体，细胞传的尽量稀，用25μg/ml的浓度处理2周，情况会有明显的好转，但是完全杀灭很难，还需要挑单克隆，得到没有污染的细胞，但是从你的图片看，不怎么象支原体污染，可能是你DAPI浓度太高，产生的非特异的细胞质着色。
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xingyi08[使用道具]
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发表于 2013-1-4 12:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也遇到这种情况，我们这的老专家说这是血清中的黑胶虫，不太好去掉
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发表于 2013-1-4 12:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 xingyi08 于 2013-1-4 12:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我也遇到这种情况，我们这的老专家说这是血清中的黑胶虫，不太好去掉

一年以前，我们实验室的细胞也出现这种情况，一直没有办法根除，上网检索的结果基本确定为黑胶虫。最后几乎所有的细胞都被污染，很是痛心...
楼主可在园子里，以“黑胶虫”为关键词检索参考。
另外还有如下的情况供参考：
1）血清浓度很低，甚至无血清时，平板很快就被铺满，甚至出现絮状的东东，细胞玩完；
2）消化细胞时，用低浓度的胰酶可以在细胞未脱落时洗掉一部分，换液频繁一点时，可以遏制一定程度不能除掉；
3）建议楼主仔细排查实验的每一环节，特别是配制培养基的用水等细节，因为我们后来从上海、北京引来的细胞在换用我们的培养基传代几次之后也出现类似情况；
4）刚开始用过一段时间的大扶康注射液（用量记不太清了，不好意思），有点儿效果但不是很理想；
5）个人感觉，夏天，可能是空气湿度太大的原因，细胞的状态普遍不是很好，容易出现问题。
关注此帖，祝楼主好运。有好消息，别忘了及时分享：）
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生物迷[使用道具]
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发表于 2013-1-4 12:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有可能是支原体污染,也有可能是血清里的微生物影响
你可以换一批血清试试!
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北风那个吹[使用道具]
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发表于 2013-1-4 12:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
现在大家意见主要分两种：支原体或者“黑胶虫”，我倾向前者，目前黑胶虫没有确切的定义，检测和处理方式，我只能先按支原体处理，安排检测和治疗同步进行：
PCR检测支原体，尽可能抽提DNA作为膜板；
定购了BM-Cyclin和Plasmocin，到货后准备分别加药做对照

大家还有什么好的建议，请与我分享，谢啦！
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发表于 2013-1-4 12:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

支原体很小，肉眼看不到的，检测支原体污染，可以用支原体检测试剂盒，我们实验室就有自己研发的这种试剂盒，我们自己都用的，每次冻存细胞之前都会检测一下，也对外销售，有需要可以联系我哦，我可不是做广告啊，偶是研三的学生。
如果污染了，可以用专门灭支源体的东东加进培养液杀，不过需要一段时间才能完全消灭，不过因为我没污染过，亲自没用过，不过我看实验室有人再用，好像一个月左右就可以了。不过据说灭过支原体的细胞今后也很容易复发的……
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北风那个吹[使用道具]
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发表于 2013-1-4 12:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 8s5g 于 2013-1-4 12:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

支原体很小，肉眼看不到的，检测支原体污染，可以用支原体检测试剂盒，我们实验室就有自己研发的这种试剂盒，我们自己都用的，每次冻存细胞之前都会检测一下，也对外销售，有需要可以联系我哦，我可不是做广告啊，偶是研三的学生。
如果 ...

你们实验室用的是什么试剂盒？
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