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标题:【求助】请高手帮忙看看细胞是不是支原体污染?

987789[使用道具]
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有可能是黑胶虫污染,40倍荧光显微镜下可见它们到处游动,不是呈布朗运动,现在的血清里多少都会有黑胶虫污染,无法清除;有可能是支原体污染,建议用双抗与卡那霉素或四环素高倍剂量联用,但要根除很难。
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kuohao17[使用道具]
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首先声明我做细胞应该算是老手。
细胞生长不好的原因很多——
1:细胞欺负生手,也就是,消化、吹打操作还有有一定影响的。当然,从上述帖子主人叙述看,贴主不应该是生手,因此,细胞生长不太好可以排除操作问题;
2:细胞生长不好与培养基直接相关,培养基中影响最为严重的就是牛血清。不知道贴主的牛血清是什么牌子?
3:支原体污染也是重要原因。但是正如上面朋友讲的,支原体在普通光学显微镜下是读不到的。我曾经检测过支原体污染,用的是牛心浸出液,即:将牛心去结缔组织,剁碎,浸煮,过滤,然后加琼脂成半固体。将细胞培养液做穿刺接种,有支原体者,围绕穿刺管道,会长出云雾状菌落。
4:细菌污染:有个别情况,细菌生长非常缓慢,似乎不太使细胞培养液体混浊,这个情况我遇到过多次;
5:环境:细胞生长不好的时候,千万记住要观察培养箱的二氧化碳的含量和温度。尤其温度,一定要看温度计,而不是看他数字显示。二氧化碳的含量可以从你培养细胞的颜色上观察,如果细胞还很稀疏液体就很黄了,多是因为二氧化碳的含量过高。当然,要同时观察多瓶细胞,而不是一瓶。
6:还有,消化液不合适也影响
7:还曾经遇到洗液配制不合适.
我们实验室的网站:百度搜索“贰拾面体”,进入后点击首页就到
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大尾巴[使用道具]
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我倾向于黑胶虫污染
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bling[使用道具]
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从以上提供的DAPI染色来看,支原体污染不典型,不太像.特别是胞外的染色,倒是像细胞碎片.有试剂盒看看吧.<个人意见,仅供参考>
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wood533[使用道具]
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首先觉得这个问题应该广泛讨论,我想很多做细胞实验的人都可能遇到过这种情况,一直以来也没有一个确定的说法,细胞培养虽然说操作简单,但涉及到方方面面,对很多培养细胞的老手来讲这也是个棘手的问题,楼主这个问题很好,体现了对科研的认真态度,图片讲解的很细致。
我曾经也遇过这种情况,较同意贰拾面体的观点。
惭愧至今我也没弄明白是怎么回事,但记得当初我用的是两性霉素和青链霉素,是对付支原体的,效果不错,之后的细胞背景趋好。我也曾怀疑是黑胶虫,但未找到合适的证明根据。
以上是个人的一点体会,望有高人指点!
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黄花菜[使用道具]
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你们用的是什么试剂盒啊,是什么价格的呢?我是研二的学生,现在正在养细胞做生物学检测,是个新手吧,看见这个帖子很好,关注!问过师兄貌似不是支源体污染,另外个人认为两性霉素和青链霉素对支原体效果不是很理想,起码我们这里是.
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wood533[使用道具]
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我的细胞也是这样,培养液不变黄,细胞生长基本不受限制。我师姐也说是所谓的黑焦虫,与细胞共生,这主要与血清有关,微孔过滤器也除不掉,只能尽早结束试验了
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greenbee[使用道具]
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你用的血清是经透析处理的吧?
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北风那个吹[使用道具]
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1. 我们用PAA的FBS和dFBS;
2. 基本排除细菌污染,因为这种现象持续至今已有1个多月,若是细菌应该早就爆发,之前在园内看到一些帖子提到类似现象可能是洋葱伯克霍尔德菌污染,我不了解这种细菌的生物特性,不知大家意见如何?
3. 我们的培养箱半个月前检测过一次,显示温度和二氧化碳显示和实际相符,所有可以排除由培养箱导致的细胞生长不良;
4. 有人提出是血清问题,但我撤掉血清后黑色小颗粒现象反倒加重,在某种程度上说明血清对其有抑制作用,所以我不完全同意是单纯的血清问题
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okhaha[使用道具]
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我们实验室在几个月前也碰到这个情况,当时我们三个培养箱的细胞全部有这个现象,H33258染色比你这个还明显,拉丝和小点非常多。我采取了两个步骤,现在基本没问题了。
1。换血清。我非常怀疑PAA的血清质量(标准血清,特级的好像没事)。我们实验室之前一直用的Hyclone的血清,换成PAA血清数月后出现这个情况,我还听到一些其它实验室用这个血清也出问题。

2。Plasmocin处理(Invivogen公司)。换血清后细胞状态有所好转,但经常反复。细胞间彻底消毒,常用好要的细胞统统扔掉,非常珍贵的不能扔的细胞用Plasmocin治疗,其它新要的细胞用预防剂量预防。效果明显,现在已经恢复正常了。

不过有一点,治疗过的细胞生长状态非常好,也没有杂质,但染色核外仍有信号,不知道为什么。

这是我的切身经验,希望对你有用。
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