细胞世界

流式细胞术 检测RAW 264.7细胞表面TLR4受体表达变化情况

各位老师 我准备用TLR4的一抗 和荧光素二抗来标记胞膜表面受体 然后用流式细胞术测得的荧光强度或带荧光的细胞个数来判定胞膜TLR4受体表达量改变情况 但由于巨噬细胞吞噬能力很强 我必须在保证包膜表面蛋白标记的同时尽量避免非特异性吞噬产生胞内TLR4标记干扰 （疑问：流式细胞术能否测的胞内的荧光物质？） 由于之前没有做过相关的实验 请各位老师能提供比较详细一点的操作步骤介绍
同时 我还看到文献中有以一抗同源IgG 作为对照的 这个对照是什么目的？

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胞内有荧光的话，也会被检测到的。
巨噬细胞吞噬，是在37度条件下进行的，你试验如果不需要37度孵育的话，那就全程冰上操作，这样会尽量减少巨噬细胞吞噬。
还有，能用已经标记好荧光的TLR4抗体么， 应该是有的，这样会好点，直标比间标好点，如果能的话。

流式细胞术 检测RAW 264.7细胞表面TLR4受体表达变化情况

各位老师 我准备用TLR4的一抗 和荧光素二抗来标记胞膜表面受体 然后用流式细胞术测得的荧光强度或带荧光的细胞个数来判定胞膜TLR4受体表达量改变情况 但由于巨噬细胞吞噬能力很强 我必须在保证包膜表面蛋白标记的同时尽量避免非特异性吞噬产生胞内TLR4标记干扰 （疑问：流式细胞术能否测的胞内的荧光物质？） 由于之前没有做过相关的实验 请各位老师能提供比较详细一点的操作步骤介绍
同时 我还看到文献中有以一抗同源IgG 作为对照的 这个对照是什么目的？

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补充一下 ，同源IgG 对照，就是比如，你用鼠抗人TLR4抗体，那么你就用个非特异性的鼠IgG做同源对照。目的就是看有多少鼠IgG非特异性结合到巨噬细胞上并被染色。这个就是你的实验背景值了

流式细胞术 检测RAW 264.7细胞表面TLR4受体表达变化情况

各位老师 我准备用TLR4的一抗 和荧光素二抗来标记胞膜表面受体 然后用流式细胞术测得的荧光强度或带荧光的细胞个数来判定胞膜TLR4受体表达量改变情况 但由于吞噬能力很强 我必须在保证包膜表面蛋白标记的同时尽量避免非特异性吞噬产生胞内TLR4标记干扰 （疑问：流式细胞术能否测的胞内的荧光物质？） 由于之前没有做过相关的实验 请各位老师能提供比较详细一点的操作步骤介绍
同时 我还看到文献中有以一抗同源IgG 作为对照的 这个对照是什么目的？

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首先:流式细胞仪是肯定可以检测胞内的荧光物质的,现在流式细胞仪所能覆盖的检测范围已经很广泛了,包括细胞表面抗原、胞内抗原、细胞分泌物以及游离的蛋白质等。

抗吞噬作用可以用以一抗同源IgG 作为对照，目的就是为了做为空白对照，检测吞噬所带来基础本底值。

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