蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【讨论帖】western blot问题解答

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 6097  103/610 |‹‹‹101102103104105106107108109110›››|
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【讨论帖】western blot问题解答

NBA[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 75229
精华 6
积分 2497
帖子 4006
信誉分 114
可用分 20946
专家分 70
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
1021

发表于 2013-2-7 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感谢解答。我以为裂解时间越长裂解的效果会越好，看来是误会了。那如果沉淀是细胞碎片的话，那我收细胞的时候是不是已经飘在培养基里不再贴壁的细胞就应该弃去不要了啊？

========================

死细胞肯定不能要啊
用预冷的PBS洗三次
洗的时候要缓慢使PBS流动
顶部
zsxan1990[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76272
精华 0
积分 442
帖子 604
信誉分 100
可用分 3776
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态 离线
1022

发表于 2013-2-7 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我配的下胶面倾斜，请问在用酒精压液面时酒精该怎样加可以避免液面倾斜，谢谢！

==========================================

你说的下胶面是浓缩胶和分离胶的交界处吗？
你的实验台有测过水平吗？把台面调水平后再试试
顶部
NBA[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 75229
精华 6
积分 2497
帖子 4006
信誉分 114
可用分 20946
专家分 70
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
1023

发表于 2013-2-7 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
做的是B-Tubulin ，第一泳道上样8ul，第二12ul，第三10ul

一抗1：10000 ，二抗1：2000

条带下面很脏，很难看，请问我的上样量是不是还要降低？还是降低抗体浓度？

=====================

1，上样量试试2ul，4ul
2，一抗 1：10000不要变
3，二抗 1：4000
试试这些条件
顶部
NBA[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 75229
精华 6
积分 2497
帖子 4006
信誉分 114
可用分 20946
专家分 70
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
1024

发表于 2013-2-7 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
做了WB检测四种细胞中某蛋白的表达，actin可以，目的蛋白的条带呈串珠样，下面是图，请楼主帮忙看看

=======================

转膜时有小气泡
抗体孵育的时候没有孵育完全
顶部
NBA[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 75229
精华 6
积分 2497
帖子 4006
信誉分 114
可用分 20946
专家分 70
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
1025

发表于 2013-2-7 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这是actin

===================================

从你的目的蛋白来看可以降低一倍上样量
你试试
顶部
NBA[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 75229
精华 6
积分 2497
帖子 4006
信誉分 114
可用分 20946
专家分 70
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
1026

发表于 2013-2-7 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我配的下胶面倾斜，请问在用酒精压液面时酒精该怎样加可以避免液面倾斜，谢谢！

=====================

用蒸馏水压就可以
加的时候从左到右慢慢加
顶部
NBA[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 75229
精华 6
积分 2497
帖子 4006
信誉分 114
可用分 20946
专家分 70
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
1027

发表于 2013-2-7 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你说的下胶面是浓缩胶和分离胶的交界处吗？
你的实验台有测过水平吗？把台面调水平后再试试

===================

这个应该没有太大关系
不会超过30度吧
顶部
sunnyB[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77335
精华 0
积分 581
帖子 862
信誉分 100
可用分 5059
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
1028

发表于 2013-2-7 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
从你的目的蛋白来看可以降低一倍上样量
你试试

=============================

降低一倍只有两种细胞出来，且很弱
顶部
yonger[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74174
精华 0
积分 572
帖子 803
信誉分 100
可用分 4861
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态 离线
1029

发表于 2013-2-7 15:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关疾病：
类风湿关节炎肺癌
今天被碧云天的裂解液雷到了，说它裂解的蛋白不能用 bradford法测浓度，以前根本没注意。要用它的BCA试剂盒，以前都是用BRADFORD测蛋白浓度的，那看来是不准啊。昏了，那是我试验怎么做出来的啊？BCA从没用过，还要酶标仪？
顶部
2541[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75124
精华 0
积分 742
帖子 1144
信誉分 100
可用分 6580
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
1030

发表于 2013-2-7 15:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好,最近作western不顺，今天跑内参，转膜之后膜用丽春红染色，每个泳道条带有的，后来封闭，加一抗，二抗，发光剂，显影。奇怪的是只有一个条带，而且很清晰。期间我还以为是片子没放好，或鸦片不均匀，压了几次，都是这样。后来将 莫洗脱，再次用丽春红染色，每个泳道还是有条带的，这是什么原因，郁闷中，特请教
顶部
 6097  103/610 |‹‹‹101102103104105106107108109110›››|