小中大相关疾病:
心肌梗死
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NBA老师,试验中又发现一些小问题,想请教一下。
1.现在天气热,27度空调房里,分离胶几分钟就凝了,减少APS和EDMET的量,20分钟左右凝好,积层胶30多分钟凝好。想问一般时间控制在多少好。我现在12%的胶上样后,积层胶还好,基本可成一条线,压线后进入分离胶就变得很散,跑到最后时,最下面溴酚蓝的带很宽,大约0.8cm,我以前跑胶时基本都很漂亮的一条线。请问这是什么造成的,会不会影响结果(个人感觉蛋白带被拉长拉细了),是不是胶凝得不好的缘故?
2.转膜,半干转,15V 45min,小点分子量的预览Mark已经转过到滤纸上了,但72KD的在胶上还可以看到残留,染胶有蛋白带残留,条带稍模糊,也很细。请教,我要不要改善转膜条件呢?是降低电压延长时间还是怎样呢?
谢谢
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1,分离胶20min左右可以啊,40min到1h凝好为佳
2,浓缩胶我一般是12min
3,溴酚蓝会跑的很宽,胶浓度为15%溴酚蓝不会散
4,转膜电压的没有经验,我用恒流,70K的蛋白我选择1.2mA每平方厘米膜面积,时间 1h10min左右