蛋白质与蛋白组学

谢谢老师指导
我们是半转干，那可能是短路了 如果是短路的话在重新做没问题吧 转印槽没事吧 只要重新跑下电泳切胶就可以了吧

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是的
这次滤纸和胶、膜大小要一致
看看还有没有短路现象

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阳萎

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恩，谢谢fangweibin119师兄！我现在每天都在做WB，但是始终是找不到最佳的一抗二抗稀释比例，我用的是DAB显色法，一抗的话试过1：500，1：1000的，二抗试过1：2000，1：4000的！一抗是santa的，二抗是ZYMED实验室的，我的上样量是25微升，大概40微克的样子，电泳液转移液都是新鲜配置的，转膜之后用立春红染色条带很清晰，但是DAB显色就是看不清，我师姐用了1：500一抗，二抗和我用的不一样，也做出来了。我的封闭时间是2个小时，TBST洗涤时间是接近45分钟，洗涤和封闭时间延长应该只有好处没有坏处吧？一抗二抗为什么不是越浓越好阿，虽然可能会有非特异的条带，但是好歹算看得见吧？谢谢，希望师兄看到的话早点回哦，谢谢！

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1，Zymed的二抗我用过，很好用，用ECL发光的时候它的稀释度是1：10000
2，一抗、二抗的浓度要合适才好，建议你看《抗体技术指南》一书

恩，谢谢NBA师兄！我现在每天都在做WB，但是始终是找不到最佳的一抗二抗稀释比例，我用的是DAB显色法，一抗的话试过1：500，1：1000的，二抗试过1：2000，1：4000的！一抗是santa的，二抗是ZYMED实验室的，我的上样量是25微升，大概40微克的样子，电泳液转移液都是新鲜配置的，转膜之后用立春红染色条带很清晰，但是DAB显色就是看不清，我师姐用了1：500一抗，二抗和我用的不一样，也做出来了。我的封闭时间是2个小时，TBST洗涤时间是接近45分钟，洗涤和封闭时间延长应该只有好处没有坏处吧？一抗二抗为什么不是越浓越好阿，虽然可能会有非特异的条带，但是好歹算看得见吧？谢谢，希望师兄看到的话早点回哦，谢谢！

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你师姐也用DAB方法吗？
DAB与ECL的抗体稀释度是不一样的
ECL要更加敏感

目的蛋白100-130KD 5%浓缩胶 8%分离胶。转膜液20%甲醇，千分之一SDS。恒流300ma 1h20min.
发现内参出现2到3条带。蛋白样品是新制的。原来做17的从来没出现过这种情况。请楼主分析一下原因。已经重复两次了，内参都是这样的。膜是新买的0.45的PVDF。

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内参变成两条首先考虑样品反复冻融，降解

请教一下，干转，电压调到25v，结果只上到16v就不增加了，为什么
转膜分子量62KD，干转，一小时十分钟可以吗

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我喜欢用恒流
1.2mA每平方厘米膜面积，转膜1h即可

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糖尿病肾病心肌梗死

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我用的六一的电泳仪DYY-7C湿转，六一的DYCZ-24DNmini型电转移，我的目的蛋白是35-38kd，请问我电转需要多久

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DYCZ-24DN mini型是电泳槽吧
湿转的话我用300mA，40min

我是新手，想问一个问题：转膜完毕后，5%脱脂牛奶封闭，4℃下可否放置3天时间？（因抗体的使用还没摸索，而实验负责人又不在）封闭时间过长对以后的一抗和2抗孵育会产生什么影响？

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我以前做过
在4度不会有太多的影响

不好意思，再补充一个问题，电泳加样一般都是用什么加呢？
我以前用微量进样器，后来老师批评说微量进样器不准，而且每次用完要现冲洗，易污染使用麻烦，让我订一种取样枪加样用的枪头，这种枪头底部很扁且长，能插进电泳槽的加样孔里边，我去网上查了几个大公司的都没有，如果版主老师知道的话，请不吝告知，多谢了！

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10ul的枪头就可以加样的
祝你好运