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标题:【讨论帖】western blot问题解答

loli[使用道具]
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发表于 2013-2-8 12:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用拔了梳子之后再加缓冲液的操作方法
加入缓冲液之后梳孔就看的不是很清楚了
有些孔是需要修改下的

=============================

谢谢老师，请问修改是什么意思呢？
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standbyme[使用道具]
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发表于 2013-2-8 12:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
组织中目的蛋白11KD，不太好做
可能在你的WB系统上有问题
另外你用细菌蛋白做WB的时候抗体应该会识别两个蛋白：GST与你的目的蛋白
但是你做组织的时候情况就会不一样了

===========================================================================================================

谢谢了，我得细菌蛋白是可以识别两个蛋白。我想请教一下，怎样才能验证我得抗血清是可以使用的？你说的WB系统有问题，可否说清楚点。谢谢了
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zhezhe[使用道具]
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发表于 2013-2-8 12:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以啊
用保鲜膜盖上
然后压片

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恩，我就是这样做的，结果第一次压片漆黑一片，第二次虽然不黑，但目的条带没有了，您看是二抗浓度高的缘故？稀释到多少合适？谢谢！！！
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any333[使用道具]
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发表于 2013-2-8 12:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
[size=2]相关疾病：
类风湿关节炎心肌梗死

=====================

是的
要用提取核蛋白的试剂

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谢谢老师，还要请教 细胞色素C、caspase-3和PARP 的转膜条件，湿转。
仪器一台是Bio-Rad的Mini-PROTEAN 3 电泳系统
另一台是北京六一仪器厂的，电泳仪电源型号 DYY-6D型，电泳仪（电转）型号 DYY-7C型
谢谢老师！
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发表于 2013-2-8 12:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
内参变成两条首先考虑样品反复冻融，降解

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请问定量灰度用什么软件好？
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发表于 2013-2-8 12:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
内参变成两条首先考虑样品反复冻融，降解

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请问定量灰度用什么软件好？
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发表于 2013-2-8 12:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢了，我得细菌蛋白是可以识别两个蛋白。我想请教一下，怎样才能验证我得抗血清是可以使用的？你说的WB系统有问题，可否说清楚点。谢谢了

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因为你做抗体的时候的抗原与天然抗原就不一样啊
你要是检测天然抗原的话只能是能检测出阳性样品天然抗原才算可以使用吧
个人这么觉得
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发表于 2013-2-8 12:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
恩，我就是这样做的，结果第一次压片漆黑一片，第二次虽然不黑，但目的条带没有了，您看是二抗浓度高的缘故？稀释到多少合适？谢谢！！！

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你现在用多大稀释比例？
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发表于 2013-2-8 12:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关疾病：
心肌梗死

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谢谢老师，还要请教 细胞色素C、caspase-3和PARP 的转膜条件，湿转。
仪器一台是Bio-Rad的Mini-PROTEAN 3 电泳系统
另一台是北京六一仪器厂的，电泳仪电源型号 DYY-6D型，电泳仪（电转）型号 DYY-7C型
谢谢老师！

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如果有半干的话最好用半干转

湿转的话300mA 用30min左右吧
而且你这三个目的蛋白每个应该都是不一样的
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发表于 2013-2-8 12:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问定量灰度用什么软件好？

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我喜欢用ImageQuant TL这个软件读取IOD值
不用灰度
这个软件有个缺点就是只能使用两周
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