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标题:【讨论帖】western blot问题解答

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发表于 2013-2-8 12:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问定量灰度用什么软件好？

===========================================

现在有人用Gel-Pro，QuantyOne等软件，我没具体用过
如果你找到好的软件告诉我一声
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zhezhe[使用道具]
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发表于 2013-2-8 12:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你现在用多大稀释比例？

===============

二抗是1：2500
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lxh031[使用道具]
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发表于 2013-2-8 12:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用提取膜蛋白的试剂
表达量少的话要提高最后检测试剂的敏感性
比如高敏感性的ECL

能推荐一个提膜蛋白的试剂公司吗（老板不肯出钱），或者组织膜蛋白提取配方，我现在提的是总蛋白，用的是碧云天强裂解液（RIPA），显色试剂用的普利来公司超强ECL发光液的，那个家的ECL发光液比较好啊
谢谢 期待您的答复
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发表于 2013-2-8 12:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
二抗是1：2500

=======================

用1：5000及1：10000试试
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发表于 2013-2-8 12:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用提取膜蛋白的试剂
表达量少的话要提高最后检测试剂的敏感性
比如高敏感性的ECL
to fangweibin119
能推荐一个提膜蛋白的试剂公司吗（老板不肯出钱），或者组织膜蛋白提取配方，我现在提的是总蛋白，用的是碧云天强裂解液（RIPA），显色试剂用的普利来公司超强ECL发光液的，那个家的ECL发光液比较好啊
谢谢 期待您的答复

======================================================

膜提取试剂建议用Pierce的，RIPA强裂解液也可以提取部分膜蛋白
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发表于 2013-2-8 12:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问同时跑两块胶，转2张膜，如何把胶和膜做标记区分，怕搞混了
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发表于 2013-2-8 12:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问同时跑两块胶，转2张膜，如何把胶和膜做标记区分，怕搞混了

===============================

用铅笔在左上角写上数字或者字母
要用铅笔！
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2013-2-8 12:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以啊
ki-67定位在细胞核
用细胞核提取试剂盒
300K多要用梯度胶或者大的分离胶

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梯度胶，我这里没有梯度仪，所以配制不了。
只能用浓度小的分离胶，内参是66kd的，那么分子量分别为359kd和66kd,要用多大浓度的胶，您给个建议！
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发表于 2013-2-8 12:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用铅笔在左上角写上数字或者字母
要用铅笔！

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谢谢，是在转膜之前泡甲醇之间就用铅笔么？
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发表于 2013-2-8 12:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
因为你做抗体的时候的抗原与天然抗原就不一样啊
你要是检测天然抗原的话只能是能检测出阳性样品天然抗原才算可以使用吧
个人这么觉得

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老师您好，首先谢谢你的解答。按你的意思来说，我做组织的western可信不高，想请教一下，组织蛋白上样量的问题，上多少量的蛋白可以？
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