小中大1，你的目的蛋白提取的怎样？
2，你做的是什么蛋白？磷酸化还是非磷酸化？需要用不同的封闭体系
3，低丰度的蛋白建议采用更加敏感的检测系统（超敏ECL），具体的你可以再问
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1.我的目的蛋白是抽提的酵母蛋白，因为现在要验证双杂筛到的两个蛋白的互作，所以想利用双杂载体上的HA和c-myc两个tag来做酵母体内的Co-IP,现在先是拿了一个抗体来做酵母提取物中的目的蛋白的检测效果都不太理想。
抽提方法是酵母菌体，液氮研磨后直接加抽提Buffer（主要成分包括PIPES，EDTA，TRITON X-100,PMSF,和蛋白酶抑制剂），4度离心20min取上清。
蛋白丰度低是低了一些，但这种方法应该也是可行的啊，其他实验室有用的。
2.实际上我有一个蛋白是激酶，最后我要证明能它能磷酸化另一个蛋白的，但是现在主要是想做Co-IP,也没考虑过具体是磷酸化还是非磷酸化的。磷酸化与否影响它们相互作用的表位吗？
3.我目前用的是HRP显影，碧云天的底物，超敏ECL是怎样的？可否推荐一下。
谢谢
