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标题:【讨论帖】western blot问题解答

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发表于 2013-2-15 10:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
老师您好，请问1.5mm的板子蛋白的上样量是多少微克呀？是蛋白的总量，不是样品的容量哦，谢谢老师！

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我喜欢用1.0的胶
上样量最大在100ug左右
1.5的胶的上样量可以大一些，150ug应该差不多
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发表于 2013-2-15 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是放在4度转膜的，原来是半干转的，能告诉我湿转的配方吗？谢谢！！！

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看看《抗体技术实验指南》
好好看看
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发表于 2013-2-15 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关疾病：
头痛
专家呀，关于western，我有一很头痛的问题，做完后发现膜上有条带，不过不是那种曝光很强留下的棕黄条带，是那种淡淡的对着光能看见的条带，用丽春红染色后显出的条带与前面看的一致，但是就是做不出结果，一抗二抗ECL显影液等各环节都没有问题，请问有可能是蛋白降解导致的呢？连actin都做不出来。我百思不得其解啊。请赐教
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发表于 2013-2-15 10:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
marker与每个样品之间上样体积都一样吗？
如果不同建议用1倍样缓补齐

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上样体积在25～27微升之间，差别不大。
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发表于 2013-2-15 10:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有站友有《抗体技术实验指南》这本书的电子版吗？能共享一下吗？谢谢！！！
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发表于 2013-2-15 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

老师您上次说上样40UG内参就应该比较好看了，请问下如果是样本一般上多少比较好，有的资料是50-80，有的是30-50？
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发表于 2013-2-15 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我转膜的缓冲液和sermester
的一样，但也是要湿转，请问谁有抗体技术实验指南这书啊，好好学习一下~
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发表于 2013-2-15 10:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再问NBA老师一个问题，strip buffer 的配方是什么啊，我只用NaOH洗膜，感觉洗不干净。谢谢！！！
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发表于 2013-2-15 10:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有站友有《抗体技术实验指南》这本书的电子版吗？能共享一下吗？谢谢！！！

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上网搜一下
有很多免费下载的链接
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发表于 2013-2-15 10:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
老师您上次说上样40UG内参就应该比较好看了，请问下如果是样本一般上多少比较好，有的资料是50-80，有的是30-50？

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我做细胞的时候上样量10ug内参就很好
组织上10ug也没有问题
但是组织蛋白浓度比细胞的高
具体上样量要通过SDS-PAGE染胶及目的蛋白的WB来确定
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