蛋白质与蛋白组学

楼主,你好,我转的膜下面有很多白色的东西(图),不知是什么,怎么避免.还有用0.45膜做分子量26kb的蛋白做不做的出来.是不是一定要用0.22的膜.谢谢

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20K以上的蛋白不建议用0.22um的膜
感觉像是膜过期了
老化

我的目的蛋白是分泌性糖蛋白分子量39.6KD。想请问您怎样才能提高蛋白提取效率，因为我的目的蛋白表达量很少
不好意思呵，请版主指教

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你做组织还是细胞？
如果细胞的话分泌性糖蛋白是分泌到细胞外还是？
组织的话用组织裂解液提取

我做的是细胞的。肯定是有分泌到细胞外的。不过上面有人做过类似的蛋白，我们都提的总蛋白。不知道版主有没有好的建议。我只是想把总蛋白提取的效率提高，检测目的蛋白表达的情况。

版主你好，遇到了头疼的事情，做WB的条件是这样的：转膜2.5h，丽春红预染有条带，5
%封闭液封闭过夜，一抗是santa 公司的，用的1：500；二抗用的天根的羊抗鼠用的1：500；1：1000；1：2000都用来摸浓度，推荐的一抗浓度是1：500到1：1000；推荐的二抗浓度是1：300到500，ECL用的是Thermo的supersignal压片时间大概5分钟的样子，但最后没有条带，连杂带都没有，连续两次都是这样的，很奇怪，头疼，请教版主，不甚感谢。

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目的蛋白是什么？
我以前用santa的抗体很多
但是近期看大家的言论觉得santa的抗体好像有一定问题

我的目的蛋白是分泌性糖蛋白分子量39.6KD。想请问您怎样才能提高蛋白提取效率，因为我的目的蛋白表达量很少
不好意思呵，请版主指教

你做组织还是细胞？
如果细胞的话分泌性糖蛋白是分泌到细胞外还是？
组织的话用组织裂解液提取

我做的是细胞的。肯定是有分泌到细胞外的。不过上面有人做过类似的蛋白，我们都提的总蛋白。不知道版主有没有好的建议。我只是想把总蛋白提取的效率提高，检测目的蛋白表达的情况。

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分泌性蛋白我做过一个细胞的
也是分泌到细胞外
没有得到阳性条带
前人做过的东西我建议你多找几篇文献来验证

相关疾病：
肿瘤

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有没有人用细胞做过血管生成相关因子VEGF,HIF-1的？请问一下操作条件？我曾经用HepG2,K562,KB,EAhy926总蛋白曝，但是都没做出来过（据说可以考虑曝培养液中的蛋白，因为VEGF在肿瘤细胞中是向外分泌的，有没有人这么做过？），后来尝试低氧诱导，用过氯化钴，环保菌素A诱导都没做出来。充氮缺氧培养也没做出来。请教做过的高手指点一二！
我的上样量40-80都试过，
12%分离胶，5%浓缩胶
电泳100V,2.5h，转膜190mA,1h
5%牛奶封闭1h
一抗1：500，二抗1：5000
据说这个用组织很好做，可是细胞做为什么这么困难呢？请大家赐教！

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VEGF我做过细胞总蛋白的
没有阳性条带
HIF-1没有问题
有结果
用胞浆、胞核蛋白抽提试剂来分别提取胞浆、胞核蛋白
因为HIF-1会在胞浆与胞核中移动
做WB时胞浆、胞核蛋白都要检测