【讨论帖】western blot问题解答 - 经验共享

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标题:【讨论帖】western blot问题解答

8princess8[使用道具]
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1581

发表于 2013-2-20 14:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

目的蛋白是什么？
我以前用santa的抗体很多
但是近期看大家的言论觉得santa的抗体好像有一定问题

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目的蛋白是CDK2 一周了没结果很奇怪

kswl870[使用道具]
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1582

发表于 2013-2-20 14:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问一下,蛋白样品的浓度太高了,用什么稀释?谢谢

NBA[使用道具]
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1583

发表于 2013-2-20 15:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

目的蛋白是CDK2 一周了没结果很奇怪

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考虑一下目的蛋白有没有提取出来

NBA[使用道具]
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1584

发表于 2013-2-20 16:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问一下,蛋白样品的浓度太高了,用什么稀释?谢谢

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裂解液

NBA[使用道具]
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1585

发表于 2013-2-20 16:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问一下,蛋白样品的浓度太高了,用什么稀释?谢谢

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如果不知道裂解液配方或者是别人给你的样品，你不知道背景信息，那么用PBS稀释

zzzz[使用道具]
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1586

发表于 2013-2-20 16:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

目的蛋白是CDK2 一周了没结果很奇怪

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原来一直用这个样品做的我是做好样品之后加lodding buffer煮沸变性后分装保存的 -20保存的不过时间可能长了点有一个多月了

wood533[使用道具]
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1587

发表于 2013-2-20 16:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

老师你好，请再帮我分析一下转膜后出现这种情况的原因（做了好多次电泳，转膜后都出现这样的现像，请问这是什么原因呢？我觉得可能是做三明治的明胶海棉太老了，中间薄周围厚，有的地方都有了小洞，但别人也是用这些海棉做的，没有出现这种现像）转膜时电流300mA，时间2小时，目的蛋白80KD。

[ 本帖最后由 wood533 于 2013-2-20 16:40 编辑 ]