蛋白质与蛋白组学

不好意思，第一次上传图，不太熟练。上面那个是图1，这个是图2，貌似显色发生了反转，蛋白条带反而不亮了，望您分析一下。

==============================

蛋白上样量要降低（降低一半试试）
同时抗体继续稀释

还有问题想要问您，如下：
我的蛋白浓度太高了，在20-30ug/ul，我们的样品蛋白用5X的loading buff 稀释（按样品：buffer=4：1）后煮变性。如果我们取上样量为100ug。上样的样品体积太少了。。。。。我请教了一些同学，他们说，可以再加2X或者3X的loading buffer补充上样体积。是否可以。。。。还有请问，如何将5X的loading buffer 稀释成2X或者3Xloading buffer。谢谢，期待您的回答。。。。

==============================================

可以用你的蛋白提取液把蛋白调整至浓度2或者3mg/ml
之后再加入5×loading不就可以了？
当然加入2×的也是可以的

各位前辈，请帮忙指点一下：
我前几天做四株癌细胞一目标蛋白表达量的比较，每株细胞设两个重复，前两株细胞目标蛋白表达均较高，条带较直，后两株细胞不表达，接着我又优势B-action想看看是不是样的问题，结果B-action比较弯，有点像逗号，并且后两个样中各有一个样B-action 没有表达，请问是哪里出了问题呀？我该注意些什么？急！！！！
先谢谢你们了！！！！

====================

建议把图贴上来
我认为转膜有些问题

请问如果我做组织蛋白 如果不是新鲜做 我的组织要怎么保存 可以保存在液氮 或者是﹣80°冰箱中吗？？

====================

-80度保存就行
如果有条件液氮更好

相关疾病：
肝癌

=============================================================================================================

NBA你好，非常感谢你的帮助，我做WB也有两个月了，近来跑电泳考染后发现15kD以下蛋白就没了，蛋白从肝癌细胞和肝癌组织中分别提取的，胶浓度是15%的，电泳55v30分钟，80v50分钟，麻烦你帮我分析一下。

======================================

15K以下蛋白用SDS-PAGE就比较难分离了
用Tricine胶试试
不过tricine胶也不太好整

您好 附图是我做的细胞提取蛋白胶片 5%脱脂奶粉室温封闭1h，santa一抗1：1500，用脱脂奶粉稀释，二抗1：5000，用TBST稀释，ECl反应1min，出来背景很深，看不到条带；之前做过一个蛋白可以看见条带，但就是在条带周围也有这样的背景，麻烦帮我分析一下原因

==================

降低一抗二抗浓度

向版主求助！我W的条带总是很弥散，而且很浓，曾出现过反影。调低一抗浓度合适吗？之前怀疑是蛋白讲解，但是新抽的蛋白也是这样。但用同门的蛋白一样的电泳及转膜条件就是很漂亮的条带！蛋白的抽提方法一样的，而且我也亲自抽过同门的蛋白。我的蛋白是110k，在160的位置有修饰后的条带。弥散的条带的位置是对的。电泳：80V浓缩胶后110v分离，300ma恒流湿转2.5～3h。不知问题出在哪里？非常感谢！！！

================================

延长分离胶聚合时间（可以4度过夜）
另外糖蛋白有些会出现弥散条带

延长分离胶聚合时间（可以4度过夜）
另外糖蛋白有些会出现弥散条带

============================================================================================================

感谢版主及时回复！我的胶都是4度过夜配好后第二天用的。此外帮同门W的基本都是漂亮的条带。希望你能帮我找找原因，不胜感激！