蛋白质与蛋白组学

因为是新手，所以一些东西还不是很清楚，我的抗体都是100ul体积的，一般怎么进行分装？

蛋白提取后-80度保存，是分装后每次现用现变性好呢还是变性后放于-20度保存好呢？

想请楼主老师把如何摸索一抗和二抗浓度的步骤说的详细点，谢谢！

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蛋白样品-80度保存较好
抗体在-20度条件下结冰吗？如果不结冰就不用分装
一抗二抗的稀释度要看你抗体的说明书，说明书会有推荐的稀释度，用它推荐的稀释度做预实验

老师您好：有几个问题请教：
1、我配的电泳液：甘氨酸144.1g，SDS10g，Tris 30.0g，定容到1l为储备液。用了几次均没有发生问题。这几天稀释的时候，室温下是清亮的，放在冰箱里就浑浊了。是怎么回事呀？是SDS的事吗？以前用同一瓶SDS配没发生过这种情况。
2，我做神经受体GABA A受体α1亚单位，分子量：52KD，上样量：80微克；胶浓度：10%,电泳条件：80U，20分钟；120U，60分钟；转膜：50U，70分钟；用PVDF膜，一抗ABCOM的，1：1000稀释，二抗santa，碱性磷酸酶的，1：3000稀释，现出现两个问题：1）表达不明显，是增加上样量？还是调整电涌或转膜时间？2）在43KD处出现明显的条带（我未作封闭），是不是可以用这个条带。因为有时只在这一处出现条带，有的时候在52KD,43KD均出现。
谢谢老师。

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1，不用放在冰箱，SDS在4度会析出
2，看说明书这些条带出现位置是否正确

最近western 出了点问题，希望版主指点一下，看附件。

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上样体积有些大了
另外感觉你的溴酚蓝加的多了
拔梳子的时候是否前后动过？拔梳子切记不能前后动，只能左右动拔出梳子

说明书上是说分子量43KD，那应该就是这么大了。后来我又新收了一批蛋白，用得是碧云天的P0013的裂解液，只含矾酸钠一种磷酸酶抑制剂，此外我还另加了PMSF。测了浓度是2ug/ul，上样40ug，用5%BSA封闭的，一抗1：1000，4度过夜，二抗1：10000，室温2h。曝光后结果和考染差不多，背景倒是没有了，但是基本上所有的条带都出来了，太明显了。当然目的条带也挺明显，可是这样的图没办法用啊。怎么办嘞！
麻烦了^^

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1，一抗浓度不合适
2，一抗特异性不好
3，封闭等用BSA

楼主 您好
分子量130KD的蛋白 我用半干转 20V 1h45min PVDF膜上可见marker 但是胶考染后仍有条带 这种现象正常吗？是不是应该全部转完才好？
非常感谢

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130K的蛋白我会选择湿转
300mA 2h