蛋白质与蛋白组学

有个问题请教楼主：

我按照你介绍选择二抗稀释倍数的方法

做了二抗点样NC膜之后DAB显色的试验

结果如图所示，请问我应该选择哪一个做为我二抗的稀释倍数呢

标示的数值对应的稀释倍数为

1、1：2500

2、1：4000

3、1：5000

4、1：6000

5、1：8000

6、1：10000

7、1：20000

请帮我看看方法对不对，并帮我选择一下合适的二抗稀释倍数

另外我对一抗的稀释度还不清楚，该怎么做呢？

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我会选择5或者6

今天转膜发生了一件奇怪的事：
转膜条件和以前一样，半干转，20V，1h
转膜之前，胶上有Maker
转膜之后，胶上，膜上都没有Maker了，下层滤纸上也看不见。
具体有没有转上，要看明天的显影结果了。

这是怎么回事呢？
很是疑惑。。。
请教了，谢谢~

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用丽春红染色看看啊

请教高手一个问题，我们实验室的同学告诉我说如果第一次发光不理想，可以把膜洗洗，重新加上发光液，再次发光，（不是加抗体，只加发光液），并且他们说可以发出来，我试了一次，没有发出来，并且从理论上来讲，好像也是讲不通的，因为发光也不是和二抗反应吗？能把发光液洗掉吗？不知道有没有战友这样做过，多谢！！！！

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可以
做过很多次
二抗中HRP催化ECL中的底物发光哦
你同学的意思是：有条带，但是不理想，你可以这样做
如果是什么都没有，再怎么加ECL都是没用的

本人做了WB一段时间，只是现在想要数据处理了，我用的是ECL曝光之后，那X胶片就放着，扫描了一下，然后用quantity one软件处理，这样可以吗？
最近知道有人用凝胶成像系统，CCD照相，这个是在曝光的时候照的相还是最后将X胶片放进去用自带的软件进行数据处理？
谢了！

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我会用CCD照相或者扫描
用ImageQuant TL软件读取IOD值
Quantity One我没用过
我们可以一起探讨

我会用CCD照相或者扫描
用ImageQuant TL软件读取IOD值
Quantity One我没用过
我们可以一起探讨

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恩 扫描的话直接用ImageQuant TL软件可以直接读出灰度值来了吗？

恩 扫描的话直接用ImageQuant TL软件可以直接读出灰度值来了吗？

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现在还用灰度呢？
都用光密度了

请问楼主，常规湿转时间太长了，你对快速转膜有什么了解吗？

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了解一点
Invitrogen有快速转膜的仪器
听说是好像是7min
但是我没用过
不知道靠谱不

楼主，您好！我想请教您一个问题：我现在做的目的蛋白是VEGF，内参是tubulin，转膜条件为200mA 2h。刚开始做的时候我先摸了一下抗体浓度，VEGF：一抗 R&D的1：500；二抗 milinpore的1：1000；tubulin一抗博奥森的1：300；二抗 milinpore的1：1000；这个条件出来带了，而且挺明显的。后来我就直接用这个浓度做。其他条件都没有改变，可是就是出不来带，郁闷的是连tubulin也没有出来。请各位高手帮我解答一下，不胜感激！！

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1，抗原、抗体可能降解了（反复冻融等）
2，缓冲液新配