蛋白质与蛋白组学

我之前做的一直都还挺正常的 为什么今天就没带了啊~~愁···条件没变啊···

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找原因
是不是换缓冲液等东西了

胶要用8%
10%的浓度有些高了

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谢谢版主！
用7.5%的胶跑了一次，结果还是那样。并且，把膜洗了，作了个内参GAPDH（37kDa ），曝光后条带清楚的显示在约60kDa 的位置上。请版主帮忙分析一下可能的原因。与目的蛋白是膜蛋白有关吗？Thanks！

谢谢，我染过胶没有串道，转印后染过胶和膜，胶上没条带，膜上有很多条带。之后我就用同样的条件电泳转印，封闭2小时后一抗4度过夜，然后二抗室温两个小时，这样用样品的混合蛋白按10，20，40，80微克，ECL显色，胶片曝光有条带而且蛋白量不同条带有明显的区别，然后我用同样的条件做单个的样品按40微克上样，结果没有看到荧光条带而且胶片曝光也没有条带，我重复多次都一样，而且染膜能看见膜上有很多条带，染胶无条带。我晕掉了，这可能是什么原因？谢谢

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这样的问题我也不知道
第一次你有结果，说明操作你没有问题
建议你仔细找找缓冲液等的问题

麻烦斑竹问一下：

我做了3次了，beta-actin不齐，有的样品有条带，有的样品没有或者很浅。除了加样，测浓度问题以外。还会在哪里出问题？我是组织蛋白~~

谢谢~~

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先跑电泳染胶看结果后再进行下一步调整

请教版主！
我检测34kDa的目的蛋白，上样40微克，20微升；浓缩胶12%，分离胶5%；膜是0.22的，湿转100v，1.5h。封闭2h。一抗1：200，4°过夜。二抗1：1000，2h。碧云天的ECL发光。
结果内参actin可以清楚的看到发光带，能曝出来，但目的蛋白的膜连荧光都看不到，不能曝出条带。
请版主帮忙分析下，非常感谢!

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1、目的蛋白没有提取出来
2、如果做过一抗的不同稀释度，你可以考虑是不是一抗有问题
3、抗体能不能识别你的种属

谢谢版主！
用7.5%的胶跑了一次，结果还是那样。并且，把膜洗了，作了个内参GAPDH（37kDa ），曝光后条带清楚的显示在约60kDa 的位置上。请版主帮忙分析一下可能的原因。与目的蛋白是膜蛋白有关吗？Thanks！

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分子量marker有问题没？

湿转还是半干转？
我喜欢用恒流
湿转：300mA 1h
半干 1.2mA 每平方厘米膜面积，1h

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谢谢版主。
我用的是nc膜，请问使用时和PVDF膜有什么区别嘛？