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标题:【讨论帖】western blot问题解答

vcve[使用道具]
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发表于 2013-2-27 12:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢楼主的及时解答！
我是重新配的浓缩胶与分离胶，再用盐酸调，不是在原来的旧液基础上调的
至于说电泳槽的接触点，我每次都能发现电极丝上的气泡很多，应该不是电源接触的问题
现在重新配了SDS，正在等待结果
再次感谢楼主，有了确定的结果再反馈给楼主啊
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发表于 2013-2-27 12:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢楼主的及时解答！
我是重新配的浓缩胶与分离胶，再用盐酸调，不是在原来的旧液基础上调的
至于说电泳槽的接触点，我每次都能发现电极丝上的气泡很多，应该不是电源接触的问题
现在重新配了SDS，正在等待结果
再次感谢楼主，有了确定的结果再反馈给楼主啊

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我有一次是因为电泳液没有加足，使得无法“泳”动，不知你是不是这个原因，仅供参考！
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发表于 2013-2-27 12:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

transfer buffer 中tris base and Glycin 的作用是什么？如果Glycin加多了会怎么样？
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发表于 2013-2-27 12:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我有一次是因为电泳液没有加足，使得无法“泳”动，不知你是不是这个原因，仅供参考！

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电泳液的量是充足的，两者内外槽有一定的落差，内槽的液体也高于矮的薄玻璃板，谢谢这位热心人
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发表于 2013-2-27 12:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
电泳液的量是充足的，两者内外槽有一定的落差，内槽的液体也高于矮的薄玻璃板，谢谢这位热心人

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不谢！请问你每次都是这样吗？我的意思是我们都是要保持液面一样高啊，由于是相通的，内槽的液面总归要下降和外面的一致的。如果单纯是内槽的液面够高也没用的，必然会直接影响电泳到。如果持平就不存在我讲的这个情况了。
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发表于 2013-2-27 12:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问版主，我相同的上样量和抗体浓度，有时候出现反影有时又是会背景很深很窄的条带，试过很多次了，对上样和抗体浓度也降低试过，但是又会出现白板的情况，很郁闷，不知您建议如何摸索？我的是核蛋白。ECL显影时会看到先有弱的荧光，但后面会看到背景出现，即一片荧光。非常感谢！
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vcve[使用道具]
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发表于 2013-2-27 12:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1，你用冰醋酸调那个试剂的pH？
2，用盐酸又是调整那个试剂？
3，我认为是你的浓缩胶与分离胶缓冲液pH的问题
4，你检查一下电泳槽的接触点

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错误找到了，真是佩服楼主的博闻强识！
“4，你检查一下电泳槽的接触点”，就是这方面的原因，电泳槽没有问题，但是电泳仪有问题，是正极的接线孔有问题，换了另外一组接线孔电泳的速度就上来了！非常欣慰！
补充一点，我犯了一个错误--认为内槽的电极丝有气泡就断言电泳仪和电泳槽都没有问题，其实内槽是负极，它有气泡（应该是氢气吧）只能说明负极的连接没有问题；而外槽的电极一般气泡（应该是氧气吧）不是很明显，所以无法直接判断正极的接线是否正确。
感谢每一位留意此贴的同仁们
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发表于 2013-2-27 12:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

弱弱的问一下：立春红能重复使用么？
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发表于 2013-2-27 12:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
弱弱的问一下：立春红能重复使用么？

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可以
但是不建议重复使用多次
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发表于 2013-2-27 12:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
transfer buffer 中tris base and Glycin 的作用是什么？如果Glycin加多了会怎么样？

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缓冲及电极液
glycine的浓度有一定的范围
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