小中大膜上的最右边是普通marker,中间最粗的是40,下面是30、24.
我的疑问:
1,好像曝光出来的带就是膜上的蛋白带,但是我的目的蛋白是膜蛋白,丰度不会那么高,请问片子上30多的主带是不是目的蛋白?
2,为什么会有那么多杂带?
3,第一种亚型的分子量是上面所说的,第二种和第三种要比第一种小2-4KD,那在片中两道明显的主带却不见有差别。
4,第二道的marker为显影可见的,以前爆出来过清晰的几条带,可是这把为什么乱七八糟?
5,第一道保护孔里没上蛋白,也没有溢进去蛋白,为什么还有带?
6,AQP4文献一般说32-34kD,为什么一抗的说明书说他们产品显得是38kD?
7,我这个预染marker的有些条带我感觉不准,跟别人的marker一起跑不一致,是否marker市场存在这样的问题?请您推荐一款准确的marker产品。
请解答,多谢!
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1、转染的细胞应该有特异性表达的条带,如染膜所示,会有条带较粗的情况
2、杂带问题与抗体有关,抗体质量、稀释度调整等
3、抗体是不是重复使用了?marker的显影与曝光时间、一抗、二抗等有关
4、marker中的蛋白影响了边上的泳道
5、不同厂家的说明是不一样的
6,预染marker肯定不准啊,需要通过预实验预染marker与非预染marker染胶后确定分子量位置,预染marker是转膜及电泳时的一个可见标志
7、30多的主带应该是目的蛋白