小中大您好，我这段时间一直在做WB，但是一直没有做好，所以想向您请教几个问题，还麻烦您能给予指导：
1，我的目的蛋白在50到65kb之间，我用的胶是12%，跑胶时的电压分别是：浓缩胶100v，分离胶80v，大概一个半小时跑完，我的这一步的问题是：我的蛋白marker跑胶之后，条带很淡，而在别人的电泳装置上，用我的marker，跑的却比较好，不知何故？
2，转膜：我用的半干转，我原来用的电流是35mA，1小时20分钟，现在用的是50mA,50min，一抗稀释比1:5000到10000，我的问题是：转膜时，我本来就很弱的蛋白marker条带，转到膜上更少，最后发光显影时，条带现在很弱。是不是我转膜的时间和电流不够啊，我想问楼主半干转时转膜的时间和电流多少为宜啊？
十分的感谢！
