蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【讨论帖】western blot问题解答

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:【讨论帖】western blot问题解答

dongdongqiang[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79825
精华 1
积分 473
帖子 601
信誉分 102
可用分 3821
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-16
状态 离线
281
 
2年不好保证有没有过期
另外膜暴露在空气中,高温会加速膜的老化
还有就是膜的最外侧最容易老化
前段时间用NC膜
用到最后一点就出现这样的问题

====================================================================================================

呵呵,果然是膜的问题,就是在最外边的最后一张膜可能过期了,这次换了张新膜用的结果就不错,再次感谢!这个帖子真是好啊!
顶部
NBA[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 75229
精华 6
积分 2497
帖子 4006
信誉分 114
可用分 20946
专家分 70
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
282
 
呵呵,果然是膜的问题,就是在最外边的最后一张膜可能过期了,这次换了张新膜用的结果就不错,再次感谢!这个帖子真是好啊!

=========================

客气
能解答问题
大家实验顺利才是真的好啊
顶部
ROSE李[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76171
精华 0
积分 466
帖子 611
信誉分 100
可用分 3866
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
283
 
你好,我想请教一下,我做出来的带为什么都散开来?就好像烧糊了一样,刚开始怀疑是样品坏了。但用了新样品后还是有一点散开,而且加了九个孔只出了一个孔的带,其他的都没出来。这是什么原因呢?谢谢指导!
顶部
NBA[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 75229
精华 6
积分 2497
帖子 4006
信誉分 114
可用分 20946
专家分 70
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
284
 
你好,我想请教一下,我做出来的带为什么都散开来?就好像烧糊了一样,刚开始怀疑是样品坏了。但用了新样品后还是有一点散开,而且加了九个孔只出了一个孔的带,其他的都没出来。这是什么原因呢?谢谢指导!

======================================

是不是糖蛋白?
如果是的话会有拖尾现象
也就是上下散开
另外要注意处理样品的过程
WB中最重要的步骤是目的蛋白的提取与处理
顶部
ROSE李[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76171
精华 0
积分 466
帖子 611
信誉分 100
可用分 3866
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
285
 
是不是糖蛋白?
如果是的话会有拖尾现象
也就是上下散开
另外要注意处理样品的过程
WB中最重要的步骤是目的蛋白的提取与处理

===========================================================================================================

不是糖蛋白,是细胞信号蛋白,不应该出现这样的。关键是加了三个高剂量的孔,却只出来一个孔的带。很奇怪。有同学做不同组织的这个蛋白出来的都挺好的。
顶部
cwcwcww[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 101434
精华 1
积分 311
帖子 277
信誉分 102
可用分 2191
专家分 10
阅读权限 255
注册 2012-12-3
状态 离线
286
 
我是新手上路,进口的beta actin大概2000块钱左右吧,我经费有限,想买国产的,您能给推荐一个产品不错的厂家吗?谢谢!
顶部
NBA[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 75229
精华 6
积分 2497
帖子 4006
信誉分 114
可用分 20946
专家分 70
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
287
 
不是糖蛋白,是细胞信号蛋白,不应该出现这样的。关键是加了三个高剂量的孔,却只出来一个孔的带。很奇怪。有同学做不同组织的这个蛋白出来的都挺好的。

=========================

那你就得看看你的样品处理了
顶部
NBA[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 75229
精华 6
积分 2497
帖子 4006
信誉分 114
可用分 20946
专家分 70
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
288
 
我是新手上路,进口的beta actin大概2000块钱左右吧,我经费有限,想买国产的,您能给推荐一个产品不错的厂家吗?谢谢!

=================

在这不方便说厂家
顶部
NBA[使用道具]
五级
Rank: 5Rank: 5


UID 75229
精华 6
积分 2497
帖子 4006
信誉分 114
可用分 20946
专家分 70
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
289
 
不是糖蛋白,是细胞信号蛋白,不应该出现这样的。关键是加了三个高剂量的孔,却只出来一个孔的带。很奇怪。有同学做不同组织的这个蛋白出来的都挺好的。

============================

在这之前你跑过电泳
染过胶吗?
有没有看SDS-PAGE的结果?
顶部
shenkunjie[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76942
精华 0
积分 712
帖子 1124
信誉分 100
可用分 6420
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
290
 
急求出现问题的答案
今天WB是实验以来最不顺利的一次。
大概情况如下,一抗4度过夜后,今天又在室温作用了4个小时,由于其他事,没顾上管,然后二抗2小时,洗两遍x5min,然后加发光底物等,结果在暗室整个膜很灿烂,全部发白光,GAPDH非常亮,目的蛋白根本看不清楚,试着暴了一下光,仅20秒,结果胶片显影定影后一片黑色。奇怪的是,我把膜提起来晾了一会,结果发现干了,立即放到TBST里面,发现膜上出现了一层粉末装的悬浮物,难道是膜上的蛋白干了后脱落了?
浸泡一会后,悬浮粉末不见了,我打算把膜洗一下后再杂交一次,不知行不行。我想问的问题是:
1,背景极强是不是因为一抗室温作用时间太长了?
2,那些白色的悬浮粉末到底是什么(需要注明,这一次我在一抗中加了0.05%的NaN3,一抗后TBST洗了3次x10min)
3,对常规的WB还有一些不清楚:封闭的作用是什么,封闭后需要再洗吗?一抗稀释液和封闭液一样的成分,为什么要洗?
在线等答案,谢谢了!
顶部