【讨论帖】western blot问题解答 - 经验共享

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标题:【讨论帖】western blot问题解答

qianqin1977[使用道具]
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2981

发表于 2013-3-8 17:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教楼主：最近电泳还是跑的非常快，，约为正常时间的3分之一，结果都没有清晰的条带。电压电流都没问题。不知道什么因素能导致跑胶快呢？我能想到的就是胶的浓度以及tris的ph值，失败了几次了，望赐教。

NBA[使用道具]
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2982

发表于 2013-3-8 17:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

改变胶浓度了？

moonlight45[使用道具]
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2983

发表于 2013-3-8 17:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

改变胶浓度了？

==============================================

由12%提高到13%了，别的就是重配了1.5Mtris。谢谢

NBA[使用道具]
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2984

发表于 2013-3-8 17:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

由12%提高到13%了，别的就是重配了1.5Mtris。谢谢

====================

检查你的胶浓度计算方法

huifeng0516[使用道具]
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2985

发表于 2013-3-8 17:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

小弟近日做一种分子量较大的蛋白（包含280/120KD 2个片段），文献提示为非还原变性，上样量为80ug，我尝试了6%及8%的胶，电转(湿转)60V 2.5h，快速封闭液0.5h，1抗(1:300)4度过夜，2抗(1:2000)1h。做了好几次都没有任何条带，而内参显示挺好的。不知各位大侠能否指导下，是否存在什么错误或不足？？？
PS：此外我用的Fermatas SM1841蛋白maker，在10孔1.5mm厚度加样20ul了，电泳后胶上显示挺好，但转膜后条带非常淡，很多还看不出来，这是为何啊？？？
非常感谢！

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2986

发表于 2013-3-8 17:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我是口腔医学研究生，我最近在做口腔牙槽骨缺损的模型，但是因为骨组织太硬不好检测圣生长因子，不知有什么办法可以像检测体液一样检测骨组织中的生长因子（比如BMP-2，骨桥蛋白，骨钙素等），万分感谢，谢谢！！

lxh031[使用道具]
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发表于 2013-3-8 17:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

求教--目的蛋白曝光时连成一条线，可能是怎样的原因？
已将二抗降低浓度，效果不佳！