蛋白质与蛋白组学

我是做western blot的新手，有几个问题想请教，望不吝赐教，先谢谢了！
1、我做的是动物组织的蛋白，分子量160kd左右，上样量为200ug，先用的10齿梳子，100v恒压电泳，2小时，基本就跑到底了，后来换了15齿的梳子，2小时只跑了一大半，请问，我是应该仍然只跑2个小时，还是要一直让它跑到底呢？
2、我用的是10%的胶跑的，效果还可以，内参分子量是40kd左右，用奥德赛直接扫的膜，很清晰，因为我还要做其他的蛋白，有的只有35kd，有的有70kd,请问我仍然用10%的胶可以么（因为想到40kd和35kd差不了多少，而且用丽春红染的，70多的位置也有很清晰的条带）？ 如果可以的话，请问电泳和转膜的时间应该怎样调整呢？（160的那个蛋白275mA恒流1小时，湿转，效果还行）
3、请问电泳缓冲液和转膜缓冲液有严格的pH值的要求么？
4、请问溴酚蓝的饱和溶液一般是百分之几啊？
先谢过了！

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1、200ug上样真够大的！
2、电泳时以溴酚蓝或者marker为准
3、35K的蛋白可以用stripping buffer洗掉后再杂交内参
4、电泳缓冲液与转移缓冲液不用调整pH
5、不知道多少饱和，不过1%的就已经不能全溶了

楼主，您好！
我是新手，有很多问题请教：
1、做的是凋亡的蛋白，电泳条件是：80v十几分钟，等到分离胶的时候换成120v的电压，等溴酚蓝跑出的时候停止电泳。转膜条件是：80v恒压50min左右，Birored的仪器，PVDF膜。
2、一抗是1：1000孵育的，2h ，二抗也是1：1000的，1h ，封闭是5%的脱脂奶粉4度过夜封闭的。
3、我做WB的时候杂带很多，条带还挺粗的。就是没有目的条带，请问是什么原因？
这些条件都是实验室的师姐师兄给的，他们做的好像还可以，请问一下有什么问题？急救……

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1、蛋白名称？分子量？
2、减少上样量
3、太笼统，我怎么说啊？

变性的时候蛋白浓度有多少？

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浓度时8ug/ul-10ug/ul,

浓度时8ug/ul-10ug/ul,

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请把蛋白浓度调整至2-4mg/ml后变性

你好，我想做纤维蛋白原跑电泳，分子量是340kd，我的问题是，这样品是冻干粉，纯的纤维蛋白原，那我样品应该怎么样处理，是不是把样溶解后，也得和上样缓冲液煮沸变性，样品和上样缓冲液的比例呢？

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一般没有特殊情况说明的情况下是溶解后加样品缓冲液变性
比例需要通过蛋白浓度来确定

你查查这个蛋白的背景资料（或者说明书），看是否需要变性

请把蛋白浓度调整至2-4mg/ml后变性

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蛋白已经变性了，怎么再调整浓度，可以再加裂解液吗？该如何操作？