蛋白质与蛋白组学

请问高手，为什么有时候我做的western总是想“M”型的带呢，就像下面的图示。很奇怪一样的手法偶尔就有，但是大部分时间是没有的，请指教，谢谢！！

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检查过胶底部的气泡吗？

我有两个相差1kD的目的蛋白（假设为a,b），二抗均为抗羊，先杂a再杂b的话，b的条带很弱但是a的条带还很强，先杂b再杂a则a的条带会很弱，二抗会累积而且很难洗掉，我试着增加一抗浓度，降低二抗浓度，结果好一些但仍然不够理想。用洗膜液洗了之后，残留的抗体是没了但是蛋白好像也被洗掉了。请问版主如何解决。

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1、样品充足，跑两次胶
2、stripping buffer会洗掉一部分抗原，但是如果是等比例往下洗的话结果是可以接受的

1、样品充足，跑两次胶
2、stripping buffer会洗掉一部分抗原，但是如果是等比例往下洗的话结果是可以接受的

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看样子只能重新跑胶了，我洗过两张膜，第二次时间减半了，结果蛋白还是没了，显影看不到带。

看样子只能重新跑胶了，我洗过两张膜，第二次时间减半了，结果蛋白还是没了，显影看不到带。

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再stripping之前条带的第一目的蛋白条带如何呢？
stripping后的效果不至于像你这样的情况

你好，
1.我的目的蛋白是110kd左右的，但是出来的条带是在170kd上面点（marker的最大指示条带是170kd，10%的胶），是什么情况?二聚体么，该怎么解决？

2.
根据待测蛋白状态确定电泳条件：
待测蛋白状态 ?? 凝胶条件 ??上样buffer ?? 电泳buffer
Reduced - Denatured ?? 还原，变性 ??含β-巯基乙醇或DTT，含SDS ?? 含SDS
Reduced - Native ?? 还原，不变性 ??含β-巯基乙醇或DTT，不含SDS ?? 不含SDS
Oxidized - Denatured ??不还原，变性 ??不含β-巯基乙醇或DTT，含SDS ?? 含SDS
Oxidized - Native ?? 不还原，不变性 ??不含β-巯基乙醇或DTT，不含SDS ?? 不含SDS

以上是我在一个资料上看到的，待测蛋白状态?这个是怎么查的？ 和是上样buffer决定的么？

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1、不同胶浓度中，marker指示的位置会有所不同
2、ruduced含有b-ME或者DTT
Denatured含有SDS
反之则不含

尊敬的前辈：
您好！我是刚做WB的小白，我的目的蛋白是53kd，但曝光结果在目的蛋白（目的蛋白已曝出）上面还有一条较细的条带，请问前辈这里面有什么问题？（我的一抗说明书上的条带只有一条），非常感谢！

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稀释一下一抗