小中大您好!我最近打算做药物对肾脏疾病NF-KB信号通路的干预作用,想用Western Blot测定NF-KB p65活性。一些国外的文献NF-KB p65活性测定采用的是普通的抗体,也有文献采用的是磷酸化的抗体,所以很不理解。园子的朋友说p65活化后入核,所以测核内普通的NF-KB p65活性与测蛋白的p-NF-KB p65活性意义是一样的,我想知道是不是这样?我是不是可以这么理解:NF-KB的活性可以通过活化的p65来反映,而p65只有活化后才能进入核内。换句话说,也就是p65的磷酸化水平可以反映核内p65的水平。那么是不是全蛋白中磷酸化的p65水平跟核蛋白中总的p65水平相一致?那么是不是可以用p-p65抗体测全蛋白中磷酸化的p65来反应NF-KB活化程度,而不一定要用普通的p65抗体测定核蛋白中p65的量?是不是这样?另外,我如果只想看下药物对NF-KB有没有影响的话是不是只要看干预组与对照组全蛋白中NF-KBp65的水平,而没必要一定要测核蛋白或者磷酸化p65的水平?请您指点!!谢谢!!!
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有没有必要测我不懂
如果要测活性需要检测总蛋白与磷酸化蛋白两种形式