小中大楼主你好！
我最近做wb一直跑不出目的条带，请您指点。
我的条件：
1.从细胞提取的蛋白质
2.目的蛋白分子量是33kD
3.电泳条件为：80v→100v
4.转膜条件为：250mA，1h
5.封闭用的5％脱脂牛奶，1h
6.一抗用的Bioscience的多抗，浓度为1：500（说明书推荐为1：500-1：1000）
4度孵育过夜
7.二抗孵育1h，浓度为1：5000（说明书推荐为1：5000-1：10000）
现象：
1.用我自己的样本可以跑出内参条带（内参用的GAPDH）但跑不出目的条带
2.用同学转好的膜（同学从组织提取做的其他蛋白，）孵育我的一抗，可以跑出目的条带。
请问我的问题出在哪里？
谢谢！
