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标题:【讨论帖】western blot问题解答

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发表于 2013-3-15 14:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是说用1%的BSA来配抗体的稀释液
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发表于 2013-3-15 14:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

老师您好！

我现在刚开始做WB,实验室买的是NC膜，一般来说NC膜用之前不用甲醇处理的，但是我的膜不用甲醇处理而直接浸泡与缓冲液中的话就死活转不过去，用甲醇处理后伯乐半干转系统15V定压，10分钟就转过了，因为预染marker已经转到最下层滤纸上了。请问该怎么处理

预染marker已经转到最下层滤纸上了，不代表已经转过了。我们实验室是用甲醇浸泡15S，双蒸水平衡5分钟就把PVDF膜放到加有20%的转膜缓冲液中去的。我的目的蛋白是12KD的，用biorad的半干转膜仪转38min次次都可以出来很漂亮的条带，转完之后，胶上的MARKER全部没有了，就是摸上面的夜很淡。预染的marker染料会运动的更快些。43-55KD的转45分钟也很好
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发表于 2013-3-15 14:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们也是用15V恒压转膜
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发表于 2013-3-15 14:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最近想做western，但不知道买那个公司的试剂，望做western的高手们给我支支招，先行谢过
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发表于 2013-3-15 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一抗santa的？

==============================

是的，他们公司的东西有这么不好吗
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发表于 2013-3-15 14:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

您好！请问若蛋白的分子量小于20转膜需要多长时间？谢谢
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发表于 2013-3-15 14:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最近在做Thy1的western blot，分子量是18kDa，跑出来的条带特别不清楚，当时转完膜后最下面的marker的两个条带都看不清，洗完后更是什么都没有了，搜索了一下说是转膜要用小孔径的，我用的是0.45um的，还有的说膜要固定一下，请各位战友指点一下啊
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发表于 2013-3-15 14:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
大哥：

请问下做SDS-PAGE一般选择哪个厂家的试剂？我最近要做这方面的实验，以前没做过，还望多多指教！谢谢
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发表于 2013-3-15 14:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教老师，我用10%的分离胶，5%的浓缩胶，预染marker10K~170K的，电泳完之后95k以上的条带分的不是很开(明显比说明书上的紧凑得多)，而我的目的条带在95k~130K之间，不知道这样会不会有影响？还有有什么办法能让marker上95k~130K之间的条带拉宽些吗？我的电泳条件是80V，2h. 谢谢
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发表于 2013-3-15 14:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问版主，封闭液，一抗和二抗分别可以用多少次？回收后能保存多久？
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