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最近烦扰我很长时间的一个问题,想请教一下LZ老师。
这段时间actin一直做的很差,而目的蛋白却还可以,不知是何原因!每次actin显出的条带都像一条弥散的棍状带(也不直),不能辨认明显的泳道,且条带弥散模糊,有点乱哄哄的不成样子,根本无法用。但目的条带较好,泳道清楚,条带较直。
1.很早之前用同样的条件做出来的actin条带很好,actin用完后重新购买了同货号的actin,条件没变再做便出现这种情况;
2.已更换过别人的actin(别人做的均较好),仍然没有改善,看来不是抗体的问题;
3.一抗浓度由原来的1:1000更换为1:2000,也未见明显改善。
不知是胶(也是用的以前的配方)有问题还是电泳的问题,为何单单actin不好,目的蛋白没事?十分苦恼,恳请LZ老师帮忙分析一下原因,提出解决办法,谢谢