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标题:【讨论帖】western blot问题解答

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发表于 2013-1-29 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的胶含水量较大，转的时间过长会不会使胶变硬，贴在膜上，另外，是不是冷却系统必须要好？

===========================================================

胶含水量比较大？
是不是分离胶浓度比较小啊？
如果湿转的话必需要有很好的冷却系统
把转移模块放至4度冰箱，同时还要加冰块在模块周围，这样效果很更好
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发表于 2013-1-29 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Biorad 7.5%的预制胶，100v电转70min, 每次转膜后部分胶总是粘在pvdf上，不好去除，请问是什么原因，谢谢。

====================

告诉我你的转移缓冲液
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发表于 2013-1-29 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Biorad 7.5%的预制胶，100v电转70min, 每次转膜后部分胶总是粘在pvdf上，不好去除，请问是什么原因，谢谢。

==============================================

我认为问题可能出现在转移缓冲液及转膜时降温的问题上
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发表于 2013-1-29 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
非常感谢你的回答，但我用的是Santa Cruz的ECL了 ，质量和敏感性应该不差了吧。我是怀疑膜蛋白提取的问题，就是膜蛋白没有提出来或是膜蛋白量太低，请问有什么好的膜蛋白提取的方法吗？
谢谢！

===============================================================

santa cruz的ECL质量肯定没有问题
但是敏感性是不一样的
你查查ECL的敏感性，这一块是值得学习和摸索的（其实在WB中这一块非常重要）
膜蛋白的提取可以增加脱氧胆酸钠的比例
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发表于 2013-1-29 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
膜用牛奶封闭了之后，要一周后才有时间做免疫反应，但怕时间长了牛奶会变质，要怎样保存才好呢？

===================================

加入叠氮钠或者硫柳汞防腐，4度保存
或者把膜取出，用滤纸上下夹好-20度保存
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发表于 2013-1-29 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般做WB的抗体都可以做IHC
但是能做IHC的不一定能做WB

不太同意你这个观点哦！
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发表于 2013-1-29 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是新手上路，进口的beta actin大概2000块钱左右吧，我经费有限，想买国产的，您能给推荐一个产品不错的厂家吗？谢谢！

===================================================================

我现在用的是上海康成的GAPDH，感觉还不错。联系方式在网上查查，价格比较便宜。
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2013-1-29 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般做WB的抗体都可以做IHC
但是能做IHC的不一定能做WB

不太同意你这个观点哦！

呵呵
说说你的观点啊

我也遇到这样的问题，WB没问题，ICC却有问题，当然也有ICC可以，但WB做不出来的。不知怎么回事。
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发表于 2013-1-29 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在用的是上海康成的GAPDH，感觉还不错。联系方式在网上查查，价格比较便宜。

======================

呵呵
内参一般都没有什么问题
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发表于 2013-1-29 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般做WB的抗体都可以做IHC
但是能做IHC的不一定能做WB

不太同意你这个观点哦！

呵呵
说说你的观点啊

我也遇到这样的问题，WB没问题，ICC却有问题，当然也有ICC可以，但WB做不出来的。不知怎么回事。

=======================

IHC做的少，偶有接触
所以不懂
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