【讨论帖】western blot问题解答 - 经验共享

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标题:【讨论帖】western blot问题解答

huifeng0516[使用道具]
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3761

发表于 2013-3-15 17:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

注意缓冲液的pH及样品

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缓冲液的PH值，我在配液体的时候调到7.5。同样样品跑两块胶，一块孵新抗体，另一块孵旧抗体，结果旧的有条带，而新的没有条带。这可以排除是样本的问题。我今天用阳性对照去做了，结果也没有结果。你觉得我的抗体会不会有问题?我的目的32kd，用的是1.5mm 的板，转膜45min，你觉得合理吗？

yonger[使用道具]
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3762

发表于 2013-3-15 17:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主，你好，请教一个问题，我跑SDS-PAGE胶的时候一直有一个问题，样品在浓缩胶中跑了5分钟左右，就会从浓缩胶和玻璃板之间漏到浓缩胶和分离胶之间，每次都这样，一开始我以为玻璃板没有洗干净或是浓缩胶没有凝好，但是我排除了这两个原因，所以想问下楼主这个问题还有可能是什么原因呢？非常感谢！急盼回复！

BOSS2011[使用道具]
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3763

发表于 2013-3-15 17:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

版主，您好，想请教您几个问题。

我之后要跑Ⅰ型前胶原蛋白，分子量约180kD，打算用8%的分离胶跑，积层胶我之前用的是4%的，需不需要改啊？

还有我们实验室转膜习惯用稳流，350mA，2.5h，我如果还用这个条件，Ⅰ型前胶原蛋白能够转上去吗？请问版主转大的分子，有没有什么其他的问题需要注意？谢谢啊！

ukonptp[使用道具]
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3764

发表于 2013-3-15 17:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我做过几次mTOR，都没有做出来，丽春红染色没见到条带，考马斯亮蓝染胶可以见到条带，怀疑转膜有问题，我用的半干转，PVDF膜，想请教一下转膜条件

3648755[使用道具]
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3765

发表于 2013-3-15 17:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

版主，您好！

我正做iNOS的WB,一抗需要用Santa Cruz公司的，但是原装进口的比较贵，想问下用分装的效果是一样吗？谢谢！

NBA[使用道具]
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