【讨论帖】western blot问题解答 - 经验共享

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标题:【讨论帖】western blot问题解答

fei1226com[使用道具]
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4071

发表于 2013-3-18 12:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

做一个抗体由这种现象

还是做所有的抗体都有这种现象？

===============

只有这种抗体

star#room[使用道具]
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4072

发表于 2013-3-18 12:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

本人做的是小窝蛋白，caveolin-1。需要做出胞浆，胞膜，还有总蛋白，版主能不能提供点提蛋白的方法和注意事项。

BOSS2011[使用道具]
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4073

发表于 2013-3-18 12:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你好，我想请问一下，我每次各个步骤的条件都一样，为什么目的有时候能跑出来有时候又跑不出来呢？我试了丽春红染色，蛋白条带每次都是在膜上的。封闭和一抗、二抗稀释都是用5%脱脂牛奶；一抗孵育先室温摇一小时，4度过夜，第二天复温一小时；TBST10min*3次；二抗室温1小时（1:3000）；TBST10min*2次，TBS10min*1次。ECL显影，曝光。我都不知道怎么回事了。

了了[使用道具]
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4074

发表于 2013-3-18 12:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

什么蛋白？

==========

是CD133

avi317[使用道具]
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4075

发表于 2013-3-18 12:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

斑竹您好，因为我收集的是临床病例，很珍贵。所以用TRIZOL提过RNA后想继续提蛋白用于western。按照TRIZOl的说明书离心最后一步1%SDS反复吹打50度温水浴重悬蛋白时很难溶解。我查了下这是个普遍问题，请问斑竹您对此有什么建议促使蛋白溶解？哪位战友有高招欢迎指导，谢谢各位