小中大你好,
1、我的MARKER只出来四条带,在溴酚蓝下面还有两条带,是不是降解了?胶肯定没问题。
2、上样缓冲液我用的是DBI公司的,比以前用的颜色浅,是不是质量问题?开盖后不好闻。
3、我用的是1.5MM的胶,以前用1.0MM的能作出来,现在换成厚的反而出不来结果了,厚度有影响么?
4、有没有用过BIO-RAD的MINI PROTEIN的仪器?转膜的条件是什么?
5、用的蛋白酶抑制剂是ROCHE的COCKTAIL,提蛋白后忘了加丄样缓冲液就变性了,变性完再加的上缓。染胶后发现大分子量蛋白特别少,是蛋白酶抑制剂不行,还是组织在低温冰箱时间长(5个月),还是丄样缓冲液没有变性?
自从实验室换了这个仪器后我都没有作出来过,现在连胶都跑不好了,真郁闷!忘楼主不吝赐教:)
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1,Marker条带位置与胶浓度大小有关,反复冻融会降解
2,上样缓冲液有没有质量问题就不好说了。不好闻是beta-巯基乙醇
3,胶厚度对结果的影响很大
4,没用过你说的这个仪器,但是对于转膜条带来说应该是一样的
5,没加样品缓冲液就变性的话蛋白质直接可能就结块了,没有SDS不行。组织在低温冰箱-80度,放一年对很多蛋白都没有影响