蛋白质与蛋白组学

老师 我用丽春红染色了，没有见到明显的条带！最近我的转膜液是新配的，转膜过程中发热很厉害，转完膜的液体上面有很多泡泡，我转膜仍然用2h 100v ,不知道什么原因，很害怕对转膜有影响。请问老师这个是什么原因引起的呢？我的转移液配方是GLy14.5g, Tris29g, sds1.85g ,甲醇200ml,水定容至1000ml,不知道这样的配方对不对 ，配完摇匀后很多气泡很就都不去，请老师指点迷津！谢谢！

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sds浓度调整至0.1%
glycine：192mM
tris：25mM
20%甲醇

换ECL

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老师，能给个理由嘛，有没有什么好的推荐一下。我想问一下转膜液一定要加0.1%的SDS嘛

我想请问一下 我显影每次都有黑的竖着的条纹 有时候还有空泡
是膜没洗干净 还是其他什么原因 关键是黑的竖着的条纹 莫名其妙的

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与胶有关

老师，能给个理由嘛，有没有什么好的推荐一下。我想问一下转膜液一定要加0.1%的SDS嘛

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ECL：WBKLS0100，Millipore

蛋白定量后，，是先加上样buffer变性再用裂解液稀释呢还是先用裂解液稀释再加上样buffer变性呢？？？

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先用裂解液
后用buffer

大师，我来求助了！
我做的目的蛋白分子量是117，抗体abcam，1：2000；内参是actin，抗体santa，1：1000。
分离胶10％，浓缩胶4％，分界线大约梳子下一厘米！
湿转恒压100V，actin转一个半小时，目标蛋白转两个半小时，做了三次，出来一次结果，比较满意！
PVDF膜，5％牛奶封闭一个小时，一抗4℃过夜，二抗避光一个小时。

但是，最近最近，问题开始出现了，不知道是不是因为天气骤然变冷的原因……一夜之间，我有了以下的问题：
1，marker开始变得非常浅，几乎看不见，以前都没问题。
2，buffer也开始变浅了，我一直用2×的，以前没问题，一夜之间，开始变浅了。
3，恒压转膜时，电流持续在200多毫安的样子，但有时莫名奇妙的达到了490毫安。
4，恒流和恒压，您建议我选择哪个呢？具体又是多长时间？多大电流或电压的要求呢？求教…………
5，浓缩胶4％和5％的区别大吗？
6，像我这样的目标蛋白，和内参，用10％的分离胶，合适吗？
在线急等您的回复……快毕业了，又给我加了一个western，悲催，问题多多啊，呵呵！

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中间换什么试剂了？