蛋白质与蛋白组学

中间换什么试剂了？

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什么也没换啊，就跟闹鬼似的，本打算大批量的做了，结果现在每次连个结果也不出了！
我准备用恒流200mA，2.5h试一试，或者换个实验室试一试！
我还怀疑我的胶配置时出了问题，下午准备去别的实验室配置看看！
哎，版主，我很蛋疼啊！

先用裂解液
后用buffer

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我用过先用buffer再用裂解液，，但是100以上分子的蛋白做出来了，，但是20几的一个也没做出来。。。不知为何？兄弟可有良方

260K的蛋白用10%的分离胶？
从你的描述来看样品出现问题的可能性较大

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能不能说明出现什么问题？？？

什么也没换啊，就跟闹鬼似的，本打算大批量的做了，结果现在每次连个结果也不出了！
我准备用恒流200mA，2.5h试一试，或者换个实验室试一试！
我还怀疑我的胶配置时出了问题，下午准备去别的实验室配置看看！
哎，版主，我很蛋疼啊！

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这种问题不好找原因
只能从你实验室本身的系统来找了

请教：刚做WB不久， 这几次发现转膜的时候，胶上的maker转不干净，pvdf膜上可以见到maker，胶上也有。新配得转膜液，1L液体tirs5.8g，glycine2.9g，methanol200ml，SDS0.37g，PH调到8.3，也4℃遇冷了，280ma，2h(呃，还想问问，这么长得时间目的蛋白会不会跑过啊？)，目的蛋白43kd，一直低温进行，2块胶一起转的，一块转的干净，胶上没有maker，另一块仍有maker。先前出现这种情况，以为是转膜液不行，重新配后还是这个样子。不知道为什么~请给点指点吧

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配制转缓的试剂是哪个公司的？
转膜：25mM tris，192mM glycine，0.01% SDS，20% methanol

我用过先用buffer再用裂解液，，但是100以上分子的蛋白做出来了，，但是20几的一个也没做出来。。。不知为何？兄弟可有良方

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20几的用0.22um的膜

配制转缓的试剂是哪个公司的？
转膜：25mM tris，192mM glycine，0.01% SDS，20% methanol

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固体试剂是Amresco的，甲醇是国药集团的。呃，问题貌似不是出在试剂上，我今天在转移槽里加了冰袋，结果就都转过去了。但是，我又有新问题了，如图。一抗是CST,1:1000,二抗，碧云天，1:1000.10孔1mm厚度，上样量10ul，浓度是3.47ug/ul.样品2和3能看见但是很细，样品1几乎看不出来，样品4就没有。这是为什么呀？？

20几的用0.22um的膜

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一直用的就是0.22的 ，，，，