蛋白质与蛋白组学

胶上也没有，滤纸上也没有。请问这是什么原因啊老师？我们用的是伯乐的系统，转膜的时候就在转膜槽中加冰块，温度会不会对这个有影响啊？

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电极放反了吧

您好，我是新手，想请教几个问题：

我的目的蛋白石28kD的，用多少浓度的分离胶合适，还有因为是细胞提取的蛋白，蛋白量比较少，电泳时需要的蛋白浓度多少为宜，一般0.75mm，10孔上样多少ul，15孔的呢？
谢谢

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12%分离胶
10孔上样量15-20ul左右
15孔上样量10-15ul左右

老师你好，我最近连续做两次western，转膜的时候都没有转上，考马斯亮蓝染凝胶及丽春红染膜都没见到蛋白，PVDF膜也没见到有marker，转膜条件100V 90min。以为是电泳液转膜液的问题，后来重新配了液体，还是同样的问题，不知道什么原因。我的目的蛋白是大分子（250-300），看文献说如果是PVDF膜降低甲醇浓度或者不加甲醇及转膜液中加入SDS至终浓度0.1%更易促进大分子转出。转膜液中第一次没有加甲醇，第二次10%，不知是不是这个原因，请老师指教。谢谢！

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250-300KD的蛋白，我们经常做
用300mA 恒流，湿转，2h30min左右，效果不错
甲醇：20%
SDS：0.01%

老师，电极没有放反哎。今天换了新的marker,130和170的marker条带看不见，是因为没转过去吗？我是85V，转2h

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湿转？
如果是湿转85V，2h转膜的话是没有问题的，130、170都能在膜上看见

谢谢老师指点。请问一下你们经常跑的250-300KD的蛋白分离胶及浓缩胶分别用多少的？今天又做了一下，还是没转上，marker只有很淡的影，丽春红染色未见蛋白，郁闷中，今天用甲醇10%，SDS 0.05%，100V 90min，电流在300mA左右。。真不知道该从哪里找原因了。

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在这个范围的蛋白已经比较少，丽春红染色未见蛋白不一定就说没有蛋白转上
100V转膜3h后，做预实验试试吧
你是整张膜转得嘛？