蛋白质与蛋白组学

请问老师，我做的WB显影后目的条带位置蛋白量很少，有很明显的拖尾，电泳时就能看到加样孔里有一些浅黄色的絮状物质，很像脂质，影响溴酚蓝的电泳，第一阶段电泳结束时无法跑成一条窄线。请问这是什么缘故呢？

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1、是什么样品？组织还是细胞？提取蛋白的时候在最上面是否有油脂？
2、可能上样量有点大

请问楼主，我最近要做110KDa的蛋白质，那需要配多少浓度的浓缩胶与分离胶呢？

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10%分离胶
4% or 5%浓缩胶均可

谢谢， 再请问楼主，不是有一种方法把一抗和二抗直接滴到膜上来检测抗体的吗？请问这种方法具体要怎么做呢？

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这种方法没试过
你是想检测一抗还是二抗？

版主，你好。我的待测蛋白是snail，CST公司的一抗，分子量是29kDa，跑了好几次western，这个snail蛋白就是不显示条带，好郁闷。
我是条件：下层胶是12%，上层胶是5%，溶液都是新鲜配制的。加样量为每孔20μg，蛋白样品是人肝癌细胞HepG2细胞。恒压70V跑电泳，一直跑到底，大约180min。转膜是恒流330mA，100min。用5%脱脂牛奶封闭1h，snail一抗浓度是1:500，4℃摇床过夜。荧光兔二抗浓度是1:5000，洗膜是用PBST，每次10min，洗3次。最后显影。

我还测试一个蛋白Vimentin，也是CST公司的一抗，分子量是57kDa，同样条件下这个蛋白就有条带的。请版主指点，snail蛋白条带就是没有，这是什么原因呢？谢谢。

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用BSA封闭及稀释一抗试试