蛋白质与蛋白组学

你说的lamin B，histone都可以作为核内参

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actin也有做核内参的文献
版内不是有很多帖子说实际上用actin做核蛋白内参是不准确的吗？
Histone不是有很多型吗？用Histone H1、Histone H2、Histone H3 or Histone H4呢？
Histone系列相对lamin系列，更难做出来些吗？
可否推荐什么公司的一抗比较好的？我做的是大鼠。

稳定WB系统

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内参和原来的抗体依旧可以做出来

样品是人肾脏。一抗有abcam的，也有axxora的，二抗是bioworld

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是样品中IgG重链非特异条带的可能性非常大

版内不是有很多帖子说实际上用actin做核蛋白内参是不准确的吗？
Histone不是有很多型吗？用Histone H1、Histone H2、Histone H3 or Histone H4呢？
Histone系列相对lamin系列，更难做出来些吗？
可否推荐什么公司的一抗比较好的？我做的是大鼠。

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我用过lamin B

一抗巴傲德的。跟卖试剂的挺熟，她说这个用着挺好，就买了。进口的用不起。
我昨天又把那两条膜洗脱之后一条孵育了巴傲德的JNK总蛋白抗体，另一条孵育了actin，想看看巴傲德的一抗有没有问题，还有我的蛋白量够不够。结果今天曝光时actin那个亮啊~JNK总蛋白也曝出来来，虽然不是很好看，但起码有条带，我还没有仔细比对marker，但是这个一抗应该是没有问题吧，背景也挺干净的。现在就是特别困惑为什么磷酸化的蛋白就是死活曝不出来。。难道压根就没有磷酸化的蛋白？可我看别人文献上相同的东西刺激，就是细胞不同，刺激浓度也跟我一样，时间点也一样，怎么回事呢到底。。我是不是应该找个阳参做做看。。

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磷酸化的JNK也很好出
p-jnk抗体是？

内参和原来的抗体依旧可以做出来

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那这么说问题就出在了新换的一抗

楼主好:
我最近一直在压磷酸化的IRS，但是一直都没有压出条带。做的是原代培养的肝原代细胞，细胞裂解液是用的碧云天的，也加了蛋白酶抑制剂。上样50微克和100微克都试过，封闭用5%脱脂奶粉和BSA均试过。一抗用的是CST的，5%脱脂奶粉和BSA都试过。1:1000和1:2000都试过了，一抗是4度过夜。二抗也是CST，1:1000和1:2000都试过，5%脱脂奶粉和BSA也都试过。洗膜都是用TBST，洗四遍，每次5min。显影是用的Thermo的ECL显影。压片一般是压15min，再久的我也试过，可就是没有条带。很多paper上是用IP做的，可我们这里没有人会，所以一直在western。

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IP简单啦