蛋白质与蛋白组学

版主您好！我最近做western blot 遇到了一个问题。用的是BIO-RED的电泳仪。加完样，开始跑胶大概十分钟后，会有一个甬道的样本漏入浓缩胶和分离胶之间。这样就导致这个孔的内参与别的孔不一致，而且会影响别的样本的最终结果。最近一直出现这个问题。我想请教一下，这可能是什么问题引起的？

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我也遇到过，可能是梳子上有水的原因，上层胶配好后多放一会，半个小时以上吧 ，下层胶最好用酒精压，倒完酒精后，吸干酒精，等酒精干了再加上层胶。

那如何改进呢？电压？有没有转膜不充分的问题？

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1、跑完SDS-PAGE后，先染色看效果
2、电泳时电压不要太高

gapdh和bcl-2两者都有残留，但是gapdh最终显影有影像，bcl-2没有影像，可能是转膜时间不对吗？

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转膜不充分啦

最近转膜后膜上的预染marker只有72KD 55KD两条带清楚，其他带都很淡，用考马斯亮蓝染胶，胶上没有条带。转膜条件是350mA 1h.这是什么原因呢？

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转膜后，膜用丽春红染色了吗/

版主您好！我最近做western blot 遇到了一个问题。用的是BIO-RED的电泳仪。加完样，开始跑胶大概十分钟后，会有一个甬道的样本漏入浓缩胶和分离胶之间。这样就导致这个孔的内参与别的孔不一致，而且会影响别的样本的最终结果。最近一直出现这个问题。我想请教一下，这可能是什么问题引起的？

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胶本身的问题

实验室以前用的都是六一的电泳槽做western, 最近全部换成了伯乐的，以前没有用过，所以想咨询一下，在灌胶的时候分离胶要多少ml,浓缩胶要多少ml ，可不可以给个具体的数值，哈这样就不用摸索了，时间有效，毕业在即啊！
哈还有就是1*电泳液要配多少合适呢，以前六一的500ml足够了，但我看了这个电泳槽挺大的。还有电转液大致配多少合适，谢谢您的指导！感激不尽！

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内槽要全部淹没过
外操，一半的高度

实验室以前用的都是六一的电泳槽做western, 最近全部换成了伯乐的，以前没有用过，所以想咨询一下，在灌胶的时候分离胶要多少ml,浓缩胶要多少ml ，可不可以给个具体的数值，哈这样就不用摸索了，时间有效，毕业在即啊！

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这个必须自己摸索
不同厚度的玻璃板要求的数量是不同的

实验室以前用的都是六一的电泳槽做western, 最近全部换成了伯乐的，以前没有用过，所以想咨询一下，在灌胶的时候分离胶要多少ml,浓缩胶要多少ml ，可不可以给个具体的数值，哈这样就不用摸索了，时间有效，毕业在即啊！

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分离胶10ml，浓缩胶5ml都会剩余很多，两块则不够。
建议你装好板子灌点水实施就知道啦