小中大版主，你好。我最近提取SD大鼠的大脑皮质层做WB，检测不同实验组蛋白激酶C的某个亚类的表达变化。
以前做的时候都能跑出很清楚的条带，但是在没有人为改变任何条件的情况下，突然出现了白板。
以下是我的实验条件：
上样量30ug/cm，目的蛋白55kd
（一）电泳
浓缩胶60V，分离胶120V,
（二）转膜
100V恒压1.5h
（三）封闭
5%脱脂奶粉（5g脱脂奶粉加入100ml0.1%TBST中）常温封闭2h
(四)孵抗体
一抗4℃过夜（Abcam,1:1000）,洗膜，15min,4次（由于我预实验跑出来的背景较深）
二抗常温1.5h(1:15000 jackson),洗膜，15min,4次。
（五）发光
发光液用的是thermo 的supersignal west pico,pico可以跑出很清晰的条带，用west dura时会出现很脏的背景。
最近几次跑WB,都是白板，后来又继续跑了两次，把电泳液，转膜液，TBST都重新配置，把胶转膜前和转膜都做了考染，发现转膜和蛋白样品都不存在问题，于是又换了一款灵敏度高的发光液dura，刚孵上的前十几秒可以肉眼都可以看到目的蛋白和内参的英冠，但很快就淬灭了，估计前几次白板可能是淬灭的原因，请教版主，您觉得可能是哪里出问题？谢谢
本来继续把其他样品跑完，WB部分就接近尾声了，可是这个星期接连跑了六块胶，全部是白板，连内参都没看到。我的实验条件没有任何变化，可是就是跑不出任何结果来，我都快愁死了，**各位高手指点迷津。。。
