蛋白质与蛋白组学

如果能见荧光的话
那就是胶片曝光了或者显影失效了

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谢谢，我再换个显影液试试。

我们一般都用总蛋白来做
您用的是哪里的裂解液？

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我用的是碧云天的细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽屉试剂盒。我原来有一瓶RIPA裂解液，但是觉得那是抽提总蛋白的，就又买了一瓶专门提核蛋白的。核蛋白浓度太低了，我两瓶细胞才提了1ug/ul，70ul。这里一个师姐做WB，她也讲都是用总蛋白做。是不是不管蛋白在哪表达，都能用总蛋白做呢？像我的这种P16，定位表达于核。也能用总蛋白做么？

请问我做出的蛋白电泳条带显色时是白色的是怎么回事呢？我是用化学发光法检测，如果有条带应该是黑色的条带，但是我最近的实验内参条带没有问题，但是目的蛋白条带是白色。我用5%脱脂奶粉37°封闭2小时，santa一抗 1：500用脱脂奶粉稀释（推荐1：100-1：1000）4°C孵过夜，国产二抗1：2000TBST稀释（推荐1：2000-1：5000）37°1小时。都是TBST洗膜3*10min。发光剂是碧云天ECL PLUS。我以前用同样的实验条件可以做出正常条带，但最近目的条带不知怎么了，总是反色，我把抗体浓度降低也不行，请专家帮我分析一下是什么原因啊？谢谢

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我觉得是显色底物太强了,消耗干净了,

版主，你好。我最近做完了一批WB，现在正在做分析，用的是image j 软件。我实验目的是想比较不同实验组之间蛋白的表达差异。实验结果内参基本一致，我以前直接用软件测了目的蛋白的表达灰度，后用两独立样本的T检验，昨天一个同学告诉我，应该将目的蛋白的灰度除以相应内参的灰度后在统计？我有点糊涂了，请版主指点。谢谢

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我用TotalLab quant或者ImageQuant 读取IOD值

要将目的蛋白的IOD除以相应内参的IOD后再统计

老师，你好，关于上面这点，我有一些小疑问，求指教：
1、二抗浓度是不是要依据一抗浓度来摸索？我们实验室最近都在摸条件，因为我们是新手，不清楚怎样调整一抗与二抗的稀释浓度，所以，希望老师给与指导。
2、我们实验室使用BSA封闭液稀释一抗和二抗浓度的。
3、您上面所讲的做二抗浓度摸索的前提是在转膜完？还是加完一抗洗脱后？

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先确定二抗的稀释度

我用的是碧云天的细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽屉试剂盒。我原来有一瓶RIPA裂解液，但是觉得那是抽提总蛋白的，就又买了一瓶专门提核蛋白的。核蛋白浓度太低了，我两瓶细胞才提了1ug/ul，70ul。这里一个师姐做WB，她也讲都是用总蛋白做。是不是不管蛋白在哪表达，都能用总蛋白做呢？像我的这种P16，定位表达于核。也能用总蛋白做么？

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我们都是用总蛋白来做的
p16可以用总蛋白来做
另外想让核蛋白提取的好一点的话，可以用短时间的超声处理一下

请问 我提取胰腺组织蛋白，有目标蛋白，但是总是见不到内参GAPDH的条带，这是为什么呢？求解 跑了很多次一直都这样子。烦恼啊！同时跑的细胞提取的蛋白有，很明显。

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1、GAPDH在这个组织中没有表达？这种情况很少
2、GAPDH抗体不识别您做的这个种属？

请问我做出的蛋白电泳条带显色时是白色的是怎么回事呢？我是用化学发光法检测，如果有条带应该是黑色的条带，但是我最近的实验内参条带没有问题，但是目的蛋白条带是白色。我用5%脱脂奶粉37°封闭2小时，santa一抗 1：500用脱脂奶粉稀释（推荐1：100-1：1000）4°C孵过夜，国产二抗1：2000TBST稀释（推荐1：2000-1：5000）37°1小时。都是TBST洗膜3*10min。发光剂是碧云天ECL PLUS。我以前用同样的实验条件可以做出正常条带，但最近目的条带不知怎么了，总是反色，我把抗体浓度降低也不行，请专家帮我分析一下是什么原因啊？谢谢

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您说的白色是哪一步有白色？？？