蛋白质与蛋白组学

还有个问题想请教，细胞的通常都是2-5mg/ml的样子，为什么动物组织通常都要做到10-20mg/ml呢？差别这么大，我想大的浓度早晚也要调低的呀，如果把动物的组织按细胞的2-5mg/ml，会有什么不良后果吗？究竟是什么道理呢？因为有时候会有些动物标本组织块比较小，比较珍贵，能不能这么做呢？

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可以

谢谢老师。
我目的蛋白可出来条带，说明系统还可以。应该主要是内参抗体出问题啦。我再稀释内参抗体看一下。
为省点膜，我把胶切开，目的蛋白部分和内参部分分别转吧。请问一下，目的91kd，内参43kd，湿转的话，最好的转膜条件应该是怎样的？

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湿转，300mA恒流，90min

今天做的western ECL发光，内参的图很好，而目的基因曝光1分钟时什么也没有，延长曝光时间至5分钟，可看到模糊的条带，感觉条带宽度可以，就只整体上模模糊糊，只能看到轮廓。 目的基因一抗是santa的，4度保存，分装后已近两年，按1:100稀释的；内参b-actin，按1:1000稀释，二抗是按1:4500稀释的。求帮忙分析一下是什么原因导致这样的结果，是一抗时间太长吗？？

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我也遇到同样的问题，有时洗膜洗的剧烈点连个影都曝不出来，试过加大上样量也解决不了问题，我的抗体也是santa的，已经用了8个月了，突然就出现上述的问题，ECL是PIERCE的supersignal，蛋白提取了大概一个月左右，有时是抗体效价下降还是蛋白降解或者其他什么原因呢，望老师能够帮忙解答，谢谢

湿转，300mA恒流，90min

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谢谢老师。目的91kd，内参43kd，不需要分别转吗？我可以跑一块胶，电泳后切开胶，省点样品。蛋白Marker是170kd，130kd，110kd，75kd,55kd,45kd,35kd......，可以在75kd（红色）和55kd（蓝色）之间切开胶的。
另外，再请教一下。我要检测8个样本，可分为4对，我用一块胶（10加样孔）电泳，,样品加在中间8个孔里，不会因为膜太长而导致两边的两个样品与中间的出现偏差吗？或者我用两块胶，每一块跑4个样品。哪种方法更好呢？