蛋白质与蛋白组学

这个蛋白浓度指？？？

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我用蛋白浓度这个表述不准确，1-4倍是根据QPCR结果作出的柱状图。我做的western是检测蛋白表达的差异，如果A样品表达1份目的蛋白，B蛋白表达多少份蛋白能在显色的条带上看出差异呢？我打算用beta-actin来试验下，将样品分别稀释1倍，2倍，3倍，4倍，看看是否能在条带上有所差别，但这个方案事实上也不严谨，beta-actin在细胞里的表达量比其他检测的蛋白样品高许多，

[ 本帖最后由 ROSE李 于 2013-3-28 17:18 编辑 ]

老师好。我做WB也有几个月了，蛋白分子量是56KD的，，做的是肺癌组织，
条件：10%的浓缩胶，4%分离胶，电泳上层120伏，下层是180V。转膜条件为20伏，15分钟。5%脱脂奶粉封闭6小时，一抗4度过夜，1:2000，二抗室温1小时，1:2500，ECL显像，所有中间步骤都是TBST洗10min,3次。
显色很模糊，一团团的呀，总是这样的没有办法半定量。现在迷茫了，不知道问题出来哪里，期待答复，谢谢

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我根据我的经验分析下，可能是你的电压太高了，条带都弥散了，建议用90V跑 2小时，分离胶浓度可以高些。

这个蛋白用裂解的上清直接进行WB的时候能检测到吗？

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也检测不到，着急呢！

楼主好，我是新手，刚开始学习WB，内参一直做不好，怀疑是丙烯酰胺的原因呢。如果丙烯酰胺不是分析纯的，会导致什么样的结果！

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丙烯酰胺会影响电泳分离效果