蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【讨论帖】western blot问题解答

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 6097  562/610 |‹‹‹560561562563564565566567568569›››|
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【讨论帖】western blot问题解答

mimili_901[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73543
精华 0
积分 564
帖子 723
信誉分 102
可用分 4458
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态 离线
5611

发表于 2013-3-30 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我点的marker是彩色的，能在膜上清楚的显示出来，所以就没有丽春红染过！我看过一些资料，一般彩色marker转膜成功的话，不需要再用丽春红染色的。
顶部
算盘阿星[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103469
精华 0
积分 154
帖子 67
信誉分 100
可用分 1051
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
5612

发表于 2013-3-30 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

老师，我的蛋白分子量分别是22KD、29KD、72KD、92KD,请问我配多大浓度的胶？转膜能一起转吗？电流和时间怎么定？谢谢
顶部
969[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74241
精华 0
积分 429
帖子 518
信誉分 100
可用分 3441
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
5613

发表于 2013-3-30 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

LZ你好，我打算做NF-kB方面的，因为要看p65的转位，是不是要分别抽核蛋白和胞浆蛋白，再行WB？请问能否推荐相应的KIt啊？
是不是用kit后，一次抽提胞核和胞浆蛋白都能得到啊？谢谢
顶部
鲇鱼少爷[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103465
精华 0
积分 161
帖子 81
信誉分 100
可用分 1111
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
5614

发表于 2013-3-30 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一抗博奥森action内参1:1000，二抗中杉抗兔1:3000,发光液用普利莱的超敏。
加上之后荧光不强，曝光3min，洗出的效果。再降抗体就没带了，要是按照这个清晰程度，还不如DAB敏感。
这是DAB显的。


查看积分策略说明
附件
2013-3-30 17:15
51178026.jpg (57.1 KB)
 
顶部
鲇鱼少爷[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103465
精华 0
积分 161
帖子 81
信誉分 100
可用分 1111
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
5615

发表于 2013-3-30 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
大家帮忙判断下原因，谢谢！同学在动物所用和我一样的东西，他说用的就是国产二抗1:10000，说荧光很强，曝光就几秒钟。

压片结果


查看积分策略说明
附件
2013-3-30 17:16
74221877.jpg (9.47 KB)
 
顶部
鲇鱼少爷[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103465
精华 0
积分 161
帖子 81
信誉分 100
可用分 1111
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
5616

发表于 2013-3-30 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这是另外一个样品的，条件同上，是原核表达的蛋白，
荧光也是不强


查看积分策略说明
附件
2013-3-30 17:16
51271107.jpg (4.98 KB)
 
顶部
鲇鱼少爷[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103465
精华 0
积分 161
帖子 81
信誉分 100
可用分 1111
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
5617

发表于 2013-3-30 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看着目的带还可以，但是降一抗要去除非特异性条带就不清楚了，同等条件DAB的结果就很特异，dab的结果下图，条件同上。


查看积分策略说明
附件
2013-3-30 17:17
75344853.jpg (2.81 KB)
 
顶部
鲇鱼少爷[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 103465
精华 0
积分 161
帖子 81
信誉分 100
可用分 1111
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-1-11
状态 离线
5618

发表于 2013-3-30 17:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
另外向大家咨询下，胶片大家都是怎么扫图的，用扫胶片的扫描仪可以吗，上面是我用扫蛋白胶的bio-rad扫的，不清晰，看胶片能比这个清晰点。
顶部
greenbee[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79370
精华 0
积分 710
帖子 1119
信誉分 100
可用分 6368
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
5619

发表于 2013-3-30 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
开始做WB，一直用Actin练手，前几天结果还可以，最近几次，背景特别黑，条带在灯光下能看清，我们用的是ECL+，X光片手动显影，请教一下是什么原因，我自己查了一下，有的说是显影液中浸泡的时间太长了，显影液中应该浸泡到X光片达到什么程度啊？谢谢！
顶部
purrr[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 72864
精华 0
积分 362
帖子 384
信誉分 100
可用分 2786
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-15
状态 离线
5620

发表于 2013-3-30 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

封闭可以不用奶粉吗 谢谢老师
顶部
 6097  562/610 |‹‹‹560561562563564565566567568569›››|