蛋白质与蛋白组学

你的实验条件没有大问题，建议你细化每个步骤
我觉得已经很好了
不知道你的结果如何
可以发给我看看
另外你有没有染胶，跑完SDS-PAGE的胶
看看总蛋白提取的如何
条带挨着很近可能是电泳没有分开，取决于分离胶浓度，电泳时间等
祝你顺利

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老师您好，遗憾的是我STAT2还是没做出来，说明书上STAT2是1：100-400都可以，我用的1：100,二抗羊抗兔我用的1：3000,曝光时还是什么都没有，需要调整抗体浓度吗？如果调，该怎么调呢？我怀疑是不是转膜或者电泳时间短了110的蛋白没上去啊？
另外我的分子大小84，91，110，好像是用得10%胶跑的，有问题吗？
我分子量大小和跑胶和转膜的时间应该没问题吧，如果想调整，该怎么调整让条带跑的更好

最近我提取的脑组织蛋白样品，在做sds-page电泳时，老是会在上样孔里看到不溶的沉淀，这是怎么回事？结果染胶发现，条带比较少。

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加点SDS

我最近做WESTERN 出现了很奇怪的问题，ing想请教您，各位大侠也可以指点指点我啊，我显影的条带经常出现很粗，很模糊的条带，下面的这两个条带上面是目的蛋白，下面是ACTIN，是两块胶跑的结果，目的条带却却缺失了两个条带，对应左边的那两个没有，用的样品也是一样的，而且条带很粗很模糊，但是我上样的蛋白量用BCA试剂盒定量只上了15ul，做ACTIN的时候，发现ACTIN的条带在暗室闪闪发光，很强烈，我的目的蛋白就不是那么回事了。我很想知道为什么显影的条带为什么这么模糊，这么粗？谢谢回复！我在园子里也看了大家的讨论，有的地方改了，一抗，二抗浓度我都降低了，做了四次还是显很粗很模糊的条带，所以想请教您。

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1，目的蛋白有拖尾现象，是不是糖蛋白之类的？
2，目的蛋白转移气泡没有赶好
3，从结果来看你可以减少一倍的上样量，那样条带会漂亮一些
4，条带模糊没关系，和你的目的 蛋白有关

老师您好，遗憾的是我STAT2还是没做出来，说明书上STAT2是1：100-400都可以，我用的1：100,二抗羊抗兔我用的1：3000,曝光时还是什么都没有，需要调整抗体浓度吗？如果调，该怎么调呢？我怀疑是不是转膜或者电泳时间短了110的蛋白没上去啊？
另外我的分子大小84，91，110，好像是用得10%胶跑的，有问题吗？
我分子量大小和跑胶和转膜的时间应该没问题吧，如果想调整，该怎么调整让条带跑的更好

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110的蛋白你可以选择用8%的胶
转膜用的是半干还是湿转？
半干 1.2mA每平方厘米膜面积，恒流，转移 1h30min
湿转：300mA 恒流，转移1h30min
good luck

楼主你好,请问你做的bcl-2用的一抗和二抗各是什么,谢谢?

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一抗鼠单抗
二抗羊抗鼠
都是santa cruz的

转膜条件基本可以
一抗与二抗浓度均较高
建议：先做二抗的稀释度（同时不同的ECL均需检测）
用点杂交
用1倍TBS或PBS稀释二抗
做不同的梯度
比如1：1000，1：2000，1：4000
稀释好后各取1ul点在NC膜上
RT干燥
加发光液
曝光
确定二抗的合适稀释度

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怎么样的结果算是合适的二抗稀释度呢？

这是改变实验条件后的结果，请帮忙分析一下，谢谢！

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二抗浓度还是有些高
建议到1：2000和1：4000试试
另外封闭时间稍微延长一些