蛋白质与蛋白组学

10个样品一起做，没有marker不行啊，我们这是bio-rad的板，好像只有10个和15孔的，没有12孔的啊

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15孔的也行啊
不过15孔的上样量要小一些
如果蛋白丰度还可以的话就能用15孔的
good luck

上样量多少ug？
我觉得可能是你的蛋白没有提取出来
另外二抗你检测过吗？是什么标记的？
二抗浓度有可能太稀了
目的蛋白定位在那？
做过内参吗？

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前辈好
我的抗体是兔多抗的
二抗是羊抗兔的
目的蛋白分别在胞膜胞浆及胞核
内参 有 还特浅淡
上样量是90微克

相关疾病：
大动脉炎

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110的蛋白你可以选择用8%的胶
转膜用的是半干还是湿转？
半干 1.2mA每平方厘米膜面积，恒流，转移 1h30min
湿转：300mA 恒流，转移1h30min
good luck

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老师您好，还是没有把STAT2做出来，好像没有8%的胶，只有10%和5%，博士德的胶说明书上没有8%，条件基本按照您的来的，请老师帮帮忙,分离胶必须要用8%的么？抗体浓度需要调整么？一抗STAT2 1:100,二抗羊抗兔1：3000.另外我是养的HEPG2细胞用干扰素刺激后收集的，再用来做WESTERN

相关疾病：
阳萎

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目的蛋白：110KD 8%分离胶，5%浓缩胶
分离胶配方(8ml)：H2O 2.635ml 30% ACR-BIS 2.16ml 1M Tris-hcl(PH 8.8) 3.04ml10% SDS 0.08ml 10% APS 0.08ML TEMED 0.005ml 用的是碧云天的SDS-PAGE凝胶试剂盒，电泳60V，分离胶120V，转膜（湿转）300mA 2h，跑的胶如图，PVDF膜连actin都出不来，同一批样品分装的，我同学帮我带样跑的时候就能够出来（样品应该没问题）。很迷茫，多谢楼主能指导……

前辈好
我的抗体是兔多抗的
二抗是羊抗兔的
目的蛋白分别在胞膜胞浆及胞核
内参 有 还特浅淡
上样量是90微克

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你染过SDS-PAGE胶没？
正常情况下20ug 内参就应该很亮了
一抗与二抗的选择是对的

老师您好，还是没有把STAT2做出来，好像没有8%的胶，只有10%和5%，博士德的胶说明书上没有8%，条件基本按照您的来的，请老师帮帮忙,分离胶必须要用8%的么？抗体浓度需要调整么？一抗STAT2 1:100,二抗羊抗兔1：3000.另外我是养的HEPG2细胞用干扰素刺激后收集的，再用来做WESTERN

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8%的胶怎么配制你可以自己算啊
另外用10%的胶也没有大问题
电泳多跑一会
你用的是那家的抗体？

请教楼主：
目的蛋白：110KD 8%分离胶，5%浓缩胶
分离胶配方(8ml)：H2O 2.635ml 30% ACR-BIS 2.16ml 1M Tris-hcl(PH 8.8) 3.04ml10% SDS 0.08ml 10% APS 0.08ML TEMED 0.005ml 用的是碧云天的SDS-PAGE凝胶试剂盒，电泳60V，分离胶120V，转膜（湿转）300mA 2h，跑的胶如图，PVDF膜连actin都出不来，同一批样品分装的，我同学帮我带样跑的时候就能够出来（样品应该没问题）。很迷茫，多谢楼主能指导……

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样品电泳这样还是有点问题的
具体问题你问问你同学啊
他不是能做出来吗
看看你的条件与他有什么不同的地方

您好，看了您的帖子真是受益匪浅。今天是我第一次做WB
条件是：六一的仪器，胶厚度1mm 上样蛋白50ug
4%分离胶 100V
10%浓缩胶 120V
0.22um孔径NC膜
一抗是博士德的1：400稀释 4度过夜
AP-NBT/BICP显色法
转膜条件是:冰水浴，湿转 β-actin 300mA 1h 结果还行，条带挺清晰
目的蛋白是胃癌SGC7901细胞中的VEGF 300mA 40min 五个样只能隐隐约约看见2个条带，很浅，几乎看不见
请老师给点修改意见，呵呵，先谢谢您了!


0.22um孔径

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目的蛋白分子量多少？
呵呵
VEGF不好做
它是一种分泌到细胞外的蛋白吧
你看见的隐约2个条带也不一定是阳性条带