蛋白质与蛋白组学

请问如果是大于120KD的蛋白质，如何进行高效的转膜

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我的是113KD
300MA 2H，应该够了，我一般350MA,1个半小时，注意降温

再请教NBA老师一个问题：预染marker好用么？我以前没用过。我现在用的预染marker是14-170的，胶跑出来以后就很明显的分成10条蓝色条带，请问，转膜的时候这些蓝色条带转到膜就能证明蛋白转到膜上了么？

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预染Marker好用啊
只能证明一部分吧
蛋白能不能转到膜上要通过染膜哦

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最近倒胶不顺，长期分离胶凝了不平，不知道怎么回事，桌面应该是平的，胶面总是往2边下降。
另外老师给的建议
1，26，43用12%胶
2，84，91，113用10%胶
这2块胶上的样本，MARK，LOADING BUFFER的排列应该是怎么样的？ 估计 会有很多孔空着，毕竟只5个样本

今天做了小分子的蛋白，一个26的一个43的，曝光很不顺利。我用的皮尔斯的ECL，一般加了后，就用膜包好放在卡盒中了，至于曝光时间一般是1-5分钟。加了ECL没亮带，曝光什么都没有，上次也这样，但是DAB显色却可以看到26的目的蛋白，不知道是怎么回事？曝光的操作有什么不对的地方么？
没亮带是不是应该加大二抗稀释度，一抗需要变化么？而且今天我用得进口抗体，直接用BSA稀释的，没有按照他的加TBST，呵呵。幸好是预试验

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1，胶不平与你加水压胶有关，加水的时候应该慢慢的从左往右加
其实WB到后面就是精益求精的事了，都在细节上，希望你能早日达到这一步哦
2，样本的安排上次我不是和你说过吗
3，加上ECL之后应该孵育5min之后再曝光，看Pierce的说明书
4，曝光操作有问题
5，看看Pierce的说明书！

请问如果是大于120KD的蛋白质，如何进行高效的转膜

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呵呵
可以用10%或者8%的分离胶
good luck

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大动脉炎

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你好，请教：做了好几次WB，每次都是内参GAPDH（37kd）无条带，目的条带（45kd）很好！条件：小鼠骨组织总蛋白，上样量60-100ug，电泳75v，30min；100v，1.5h；转膜，300mA，1h；santa cruz GAPDH一抗，1：50，1：100，1：200，二抗1：2000，1：2500，1：5000均试过，没有条带，伤脑筋，不知道什么原因？

换GAPDH一抗

刚换的GAPDH一抗，不再是白板了，都是非特异性条带，目的条带却没有，有可能是什么原因？谢谢！

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1，santa 的GAPDH我用过，效果一般
2，骨组织中有没有GAPDH表达？
3，如果确定有表达的话建议换GAPDH

我的是113KD
300MA 2H，应该够了，我一般350MA,1个半小时，注意降温

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呵呵
350mA可以这么转

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1，胶不平与你加水压胶有关，加水的时候应该慢慢的从左往右加
其实WB到后面就是精益求精的事了，都在细节上，希望你能早日达到这一步哦
2，样本的安排上次我不是和你说过吗
3，加上ECL之后应该孵育5min之后再曝光，看Pierce的说明书
4，曝光操作有问题
5，看看Pierce的说明书！

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可以这样上buffer、PBMC、PBMC、PBMC、buffer、Marker、PBMC、PBMC、PBMC、buffer,老师您说的这个是一块胶上的。
我的意思是一块胶上3个样本，另一块2个样本，该怎么加？
关于空白孔的上样缓冲液我一把是2X LOADING BUFFER加等体积的溴芬兰，不知道有没有问题？
麻烦老师了，新人问题比较多