现代分析实验

最近在做紫外测定总皂苷，我将初提物用石油醚脱脂后再用正丁醇萃取了，显色剂用了三种：香草醛-冰醋酸-硫酸；香草醛-冰醋酸-高氯酸；香草醛-乙醇-硫酸。三种显色剂做出来最大吸收波长都差不多在476nm左右，但是，我的对照品用的是齐墩果酸，吸收波长却在 550-600nm之间，请问，这是为什么？是我的对照品用的不对吗？可是我看文献差不多对照品都在550nm左右啊，可为什么我的样品在476nm呢？
望各位帮帮忙~~~多谢多谢~~~~

最佳波长的选定主要有两个依据：
1） 所测物质在此波长具有较大吸收（不一定是最大吸收) （即所测物质在此波长下有较大的吸光系数）
2) 所用体系在此波长下应具有最小干扰（溶剂及其它试剂在此波长不应有明显吸收？）
就是说最佳波长不一定是最大吸收波长，要根据情况而定。从你的描述中知道样品应该是一个混合物，混合物中因为有杂质存在，最大吸收与对照品不一致是正常的。但是我不知道样品在550nm时吸收的情况，如果样品在550nm吸收值太低，就一定要换别的对照品了。

1.并非齐墩果酸适用于所有总皂苷的显色测定，可更换对照品。例如，人参总皂苷的含测使用人参皂苷Re,黄芪总皂苷的含测使用黄芪甲苷.......，不知道你测定的是哪一类的苷。
2. 显色后的对照品溶液与显色后的试样溶液的最大吸收波长不一致（当然最好一致），不是问题的关键。关键的问题在于未显色的试样溶液在测定波长处有没有吸收，因此必须做未显色的试样溶液的可见光区范围内的波长扫描，且显色测定时使用试样空白。如未显色的试样溶液在测定波长处没有吸收，显色后的对照品溶液与显色后的试样溶液在测定波长处有吸收，即使最大吸收波长不一致，也只影响测定的灵敏度。
3.可使用1%茴香醛-硫酸-乙醇显色剂，试试。此显色剂还可消除单糖的干扰。
4.水浴温度应控制在70~80℃之间较好。时间15-20分。

谢谢大家的帮助，我想做的是一个复方的总皂苷的紫外含量测定，里面含有人参也含有黄芪，可以用黄芪甲甘做对照品吗？
我做了未显色的试样溶液在可见光范围内的波长扫描，在400-600都没有吸收，因此应该是没有影响的，我再试试大家给我的意见，再次谢谢，有什么情况再向大家讨教。

应该换你所用药材中有的成分，且提取率比较高的做对照品比较合适。