北京时间1月25日凌晨消息，新西兰牛奶中发现了有害物质——双氰胺。双氰胺又名二氰二胺，缩写DICY或DCD。虽然国际标准未对食品中的双氰胺限量，但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。
本文采用天津博纳艾杰尔科技的Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管和Venusil® HILIC液相色谱柱，建立了奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS快速前处理方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。
1 实验部分
1.1 仪器、试剂与材料
高效液相色谱仪，涡旋振荡器，超声波清洗机，氮吹仪。
双氰胺标准品（CAS： 461-58-5；FW=84.08），Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管，Venusil® HILIC液相色谱柱，微孔滤膜，乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯，实验用水为超纯水。
bbcodeurl('http://www.agela.com.cn/UserFiles/图1双氰胺分子式.jpg', '%s')
1.2 实验步骤
提取、净化：称取1g试样于50mL具塞离心管中，加入2mL水溶解后，加乙腈定容至10mL，超声10min，8000r/min离心5min，取2mL上清液加入Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管填料，涡旋0.5min，8000r/min离心5min，取上清液过0.22µm滤膜，待测。
1.3 实验条件
1.3.1高效液相色谱法（HPLC法）：
色谱柱：Venusil® HILIC（5μm，100Å，4.6*250mm）；
流动相： 10mmol/L乙酸铵（pH=4.0）：乙腈=10: 90；
波长：220nm；进样量：10µl；柱温：30℃；流速：1mL/min。
1.3.2 LC-MS/MS法：
（1）色谱条件：
色谱柱：Venusil® HILIC（ 5μm，100Å，2.1*150mm）；
流动相： 0.5mmol/L乙酸铵（pH=4.0）：乙腈=10:90；进样量：10µL；柱温：30℃；流速：0.2 mL/min。
（2）质谱条件：
质谱仪：API 4000+；离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；CAD：8.00；CUR：10.00；GS1：60.00；GS2：50.00；IS：5500.00；TEM：500.00。
表1双氰胺质谱信息
parsetable('', '', '[tr][td]药物名称[/td][td]监测离子对[/td][td]DP[/td][td]EP[/td][td]CE[/td][td]CXP[/td][/tr][tr][td]双氰胺[/td][td]
85.1/68.1[/td][td]71[/td][td]10[/td][td]41[/td][td]6[/td][/tr][tr][td][/td][td]85.1/43.1[/td][td]71[/td][td]10[/td][td]41[/td][td]6[/td][/tr]')
注：带“____”的监测离子对为定量离子对。
2.结果与讨论
2.1 高效液相色谱法：
2.1.1线性关系和检出限
准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为标准贮备液；
分别量取一定量的标准贮备液，用乙腈稀释，配置成浓度为0.1µg/mL，0.5µg/mL，1.0µg/mL，2.0µg/mL，5.0µg/mL和10.0µg/mL的标准溶液，按照上述色谱条件，依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见表2：
表2 双氰胺线性方程和定量限（HPLC法）
parsetable('', '', '[tr][td]名称[/td][td]保留时间[/td][td]线性方程[/td][td]相关系数[/td][td]最低定量限（S/N=10）[/td][/tr][tr][td]双氰胺[/td][td]4.92min[/td][td]Y=116.44X+3.2699[/td][td]0.9997[/td][td]0.1µg/ml[/td][/tr]')
2.1.2检测方法稳定性考察
选用10.0µg/mL的标准溶液连续进样6针，计算其保留时间和峰面积的RSD值，结果见表3：
表3 检测方法定性和定量稳定性考察考察（HPLC法）
parsetable('', '', '[tr][td]标号[/td][td]保留时间/ min[/td][td]峰面积[/td][/tr][tr][td]1[/td][td]4.930[/td][td]1061.7[/td][/tr][tr][td]2[/td][td]4.933[/td][td]1072.2[/td][/tr][tr][td]3[/td][td]4.930[/td][td]1064.4[/td][/tr][tr][td]4[/td][td]4.929[/td][td]1079.7[/td][/tr][tr][td]5[/td][td]4.930[/td][td]1067.3[/td][/tr][tr][td]6[/td][td]4.934[/td][td]1073.6[/td][/tr][tr][td]RSD，%[/td][td]0.04[/td][td]0.62[/td][/tr]')
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2.1.3准确度和精密度
选取市售某品牌奶粉试样，进行添加回收实验，结果见表4
表4 10µg/g添加回收实验结果（HPLC法）
parsetable('', '', '[tr][td]平行1，%[/td][td]平行2，%[/td][td]平行3，%[/td][td]平均值，%[/td][td]RSD，%[/td][/tr][tr][td]98.6[/td][td]88.4[/td][td]89.8[/td][td]92.3[/td][td]5.99[/td][/tr]')
bbcodeurl('http://www.agela.com.cn/UserFiles/图4-5.jpg', '%s')
2.2 LC-MS/MS法
2.2.1线性关系和检出限
准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中，加水溶液并稀释至刻度，作为标准贮备液。
分别量取一定量的标准贮备液，用乙腈稀释，配置成浓度为5ng/mL，10ng/mL，20ng/mL，50ng/mL，100ng/mL和500ng/mL的标准溶液，按照上述液质方法，依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见下表5：
表5 双氰胺线性方程和定量限（LC-MS/MS法）
parsetable('', '', '[tr][td]名称[/td][td]保留时间[/td][td]线性方程[/td][td]相关系数[/td][td]最低定量限（S/N=10）[/td][/tr][tr][td]双氰胺[/td][td]3.15min[/td][td]Y=8777.2X+7435.9[/td][td]0.9993[/td][td]5ng/mL[/td][/tr]')
2.2.2 检测方法稳定性考察
选用50.0ng/mL的标准溶液连续进样6针，计算其保留时间和峰面积的RSD值，结果见表6：
表6 检测方法定性和定量稳定性考察考察（LC-MS/MS法）
parsetable('', '', '[tr][td]标号[/td][td]保留时间，min[/td][td]峰面积[/td][/tr][tr][td]1[/td][td]3.29[/td][td]382950[/td][/tr][tr][td]2[/td][td]3.30[/td][td]387950[/td][/tr][tr][td]3[/td][td]3.25[/td][td]382840[/td][/tr][tr][td]4[/td][td]3.31[/td][td]399820[/td][/tr][tr][td]5[/td][td]3.30[/td][td]378580[/td][/tr][tr][td]6[/td][td]3.30[/td][td]383810[/td][/tr][tr][td]RSD，%[/td][td]0.65[/td][td]1.92[/td][/tr]')
2.2.3准确度和精密度
选取市售某品牌奶粉试样，进行添加回收实验，结果见表7。采用空白样品稀释法判断检测方法的基质效应影响。空白净化液稀释和乙腈稀释的标准溶液，双氰胺峰面积和相对丰度比无明显变化，故判断该方法无基质效应的影响。
表7 100ng/g添加回收实验结果
parsetable('', '', '[tr][td]平行1[/td][td]平行2[/td][td]平行3[/td][td]平均值[/td][td]RSD[/td][/tr][tr][td]84.6%[/td][td]80.7%[/td][td]90.2%[/td][td]85.2%[/td][td]5.61%[/td][/tr]')
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3 产品订货信息
parsetable('', '', '[tr][td]
产品名称[/td][td]
规格型号[/td][td]
货号[/td][/tr][tr][td]MAS-QuChERS-双氰胺净化管[/td][td]100mg/2mL，50支/包[/td][td]MS-SQA01[/td][/tr][tr][td=1,2]Venusil HILIC液相色谱柱[/td][td]4.6*250mm，5μm，100Å[/td][td]VH952505-0[/td][/tr][tr][td]2.1*150mm，5μm，100Å[/td][td]VH951502-0[/td][/tr][tr][td]微孔滤膜[/td][td]0.22μm，直径13mm, 200/Pk[/td][td]AM021320[/td][/tr][tr][td=1,2]双氰胺对照品[/td][td]500mg /瓶，含量≥99.0%[/td][td]DCD001[/td][/tr][tr][td]1g /瓶，含量≥99.0%[/td][td]DCD002[/td][/tr][tr][td]离心管[/td][td]50mL，带螺纹盖，25个/包[/td][td]LXG0050[/td][/tr][tr][td]一次性无菌注射器[/td][td]5mL,100/pk[/td][td]ZSQ-5ML[/td][/tr]')
相关方法：婴幼儿奶粉中双氰胺的检测方法（HPLC-UV和HPLC-MS/MS法）
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本帖最后由 maggiesea 于 2013-1-30 00:57 编辑 ]
